四川褐藻寡糖复配

利用高效安全无污染的生物制剂褐藻寡糖外源喷施黄瓜幼苗，将黄瓜幼 苗分为喷施组和未喷施组；再配制不同浓度（0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、） 的褐藻寡糖溶液喷施黄瓜幼苗。对黄瓜幼苗的生长指标，抗氧化酶活性及抗氧化 酶相关基因、WRKY 基因家族对褐藻寡糖应答情况进行测定。旨在探究不同浓 度褐藻寡糖对黄瓜的生长、产量及品质的影响，对褐藻寡糖对作物促进作用的机 理进行了初步研究，探索 WRKY 转录因子和褐藻寡糖在黄瓜生长中的重要功能 及作用机制。褐藻寡糖促进黄瓜幼苗生长发育，主要表现为生物量（株高、茎粗）随 着浓度的升高呈增长趋势，叶片数增多。与未喷施组相比，喷施组生物量均有所 改善。对果期产量也有所提高。褐藻寡糖水溶性好，易于被吸收利用，也是重要的信号分子，能够参与植物的生长调节和诱导抗病的过程。四川褐藻寡糖复配

褐藻寡糖对CAT活性的影响植物遭受低温伤害时,过氧化氢酶系统首先受到破坏损伤,造成体内过氧化氢去除链条断裂、积累增加,由于过氧化氢积累可以严重损害植物细胞膜和其它代谢酶类,因此CAT活力能够反映植物去除过氧化氢能力强弱和植物遭受损程度大小。图6为烟C叶片CAT活力变化。由图可知,水处理组在低温胁迫后,短时间内CAT活力迅速下降,随着时间延长,植物体内抗逆反应启动,会增加CAT生成以去除积累的过氧化氢,因此CAT含量又缓慢升高。喷施寡糖后进行低温胁迫,0.05%,0.20%,0.30%ADO组中烟CCAT活力变化规律相似:短时间内均能够诱导烟CCAT活力迅速升高,12h达到高峰,且峰值都高于空白对照,随着时间延长,CAT活力又缓慢下降,以0.20%褐藻寡糖的诱导效果好;0.10%褐藻寡糖处理组在6～24h之内CAT含量与对照相比变化较小,但48h烟C叶片CAT活力迅速下降,说明CAT受到破坏而活力降低。高浓度1.00%褐藻寡糖组经过相同时间低温胁迫,其CAT活力均低于水处理组,说明1.00%褐藻寡糖对烟C产生了毒副作用,加剧了烟C叶片损伤。四川褐藻寡糖复配褐藻寡糖能够作为信号调节分子作用于植物，促进植物的生长，此研究为海洋活性寡糖的开发开辟了新的途径。

选择三种来源（褐藻胶、果胶、壳聚糖）的不同分子量大小的九种寡糖片段进行研究。利用植物的促生长和抗逆指标进行筛选，获得了一种既具 有明显的促生长作用，又具有抗逆作用的寡糖片段，为褐藻寡糖 HZ3，经过质谱分析，其组分是以二、三糖为主的含有少量四糖和五糖的寡糖混合物。本研究第二部分是利用植物的植株、愈伤组织和悬浮细胞为材料，建立起寡糖促生长的综合性的验证方法。对植株分别选择了双子叶植物豌豆和单子叶植物玉米，利用寡糖浸种，分别考察在种子萌发与幼苗生长初期其体内蛋白酶、淀粉酶和激S含量的变化，结合种子与植株的生长指标，探讨寡糖的促生长作用机理。

褐藻寡糖已被 证实对草本植物具有明显的提质、抗逆效果，如水稻、小麦等(张运红等, 2016b; 张运红等, 2017; 荆华和王 康健, 2018, 北方水稻, 48(3): 22-24.)。褐藻寡糖的抗逆机理推测为：褐藻寡糖通过蛋白质磷酸化与去磷酸化， 使细胞核内相关抗逆基因激发，提高抗逆酶系活力，进而促进木质素合成、植保素合成和胁迫激S产生， 调节渗透调节物质的产生(游离脯氨酸, 可溶性糖等)。通过渗透调节物质降低活性氧及质膜过氧化，并维 持细胞渗透压稳定，进而提高翅碱蓬的抗盐胁迫能力。褐藻寡糖在生命体内具有重要的作用，其作为信号分子对植物的诱导抗逆和生长调节作用正逐步的深入。

AOS对PVX、TMV有较好的防治效果分别在喷施AOS前24h和喷施AOS后24h接种带有GFP标签的PVX。发病后,在紫外灯下观察绿色荧光并检测病毒积累量。结果显示先喷施AOS后接种PVX,5d后,30.6%系统叶片出现荧光,而喷施ddH2O的本氏烟,85.7%上部叶片出现荧光;喷施AOS的本氏烟中病毒的积累量也明显低于对照。先接种PVX后喷施AOS,与喷施ddH2O的本氏烟系统叶片的荧光强度并无明显区别,本氏烟中病毒的积累量也无明显差异。以上结果说明,AOS对病毒有明显的预防效果。用不同浓度的AOS处理本氏烟后接种PVX,检测抗病效果,结果显示在AOS浓度为100μg/mL时,其抗病效果好。之后,采用100μg/mL的AOS喷施本氏烟后,接种烟C花叶病毒（TMV）,发现与对照组相比,AOS处理的叶片上荧光强度也明显减弱,TMV的积累量也明显降低,表明AOS也可以增强植物对TMV的抗性。以上结果说明,AOS增强植物对病毒的抗性具有普遍性。褐藻胶寡糖对植物来说也是一种重要的信号分子，能够参与植物的生长调节和诱导抗病过程。青海褐藻寡糖孤儿药

褐藻寡糖存放时应注意防霉、防晒，请放置阴凉干燥处保存。四川褐藻寡糖复配

AOS增强植株对致病疫霉的抗性用100μg/mLAOS分别喷施拟南芥和本氏烟,24h后,接种致病疫霉。结果显示与喷施ddH2O的植株相比,AOS处理的叶片接种部位的水渍及叶片的黄化程度明显降低,检测致病疫霉菌丝的生长量也明显低于对照,表明AOS也可以增强植株对致病疫霉的抗性。AOS诱导植物早期免疫应答反应对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行相关免疫反应的检测。结果显示,在气孔开度方面,与ddH2O处理的对照组相比,AOS处理的本氏烟叶片的气孔开度明显较低,表明AOS通过调节叶片表面气孔的开合抑制病原菌的入侵。分别于2h、4h、8h、24h和48h时,对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行DAB和NBT组织化学染色,发现喷施ddH2O的叶片染色程度较浅,而喷施AOS的叶片染色程度较深,且在24h时染色深。qRT-PCR检测ROS合成基因RbohA、RbohB以及去除基因SOD、APX和CAT表达水平,显示RbohB基因表达量明显上调,CAT基因表达量明显下降,说明AOS可以通过抑制CAT基因和促进RbohB基因的表达,提高过氧化氢的积累。四川褐藻寡糖复配

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