广西褐藻寡糖 企业标准

马尾藻是我国南海常见的大型经济褐藻,也是褐藻多糖的重要来源。褐藻多糖及其降解产物—褐藻寡糖,具有众多生物活性,在农业、医药、化妆品等领域具有广阔的应用前景。以采自海南琼海海域的孤囊马尾藻为研究对象,探究了一种有效提取褐藻多糖和酶解制备褐藻寡糖的方法,并对制备的褐藻多糖及寡糖进行纯化、结构分析和活性评价。研究结果如下:采用超声波辅助热碱法,通过响应面优化获得孤囊马尾藻多糖的比较好提取工艺,在超声功率500W、料液比1:25、提取时间5.95h、提取温度82.27℃、NaOH质量分数3.87%的条件下粗多糖得率为41.23%±0.98%。采用TCA沉淀法除蛋白,粗多糖的蛋白去除率达到81.93%,多糖保留率92.17%;优化了H2O2氧化法除色素工艺,在H2O2浓度1.5%、70℃条件下脱色6h时,脱色率达到91.23%,多糖保留率为85.32%。采用DEAE-52离子交换层析柱对初步纯化后的多糖进一步分离纯化,获得SOP1、SOP2和SOP3三个多糖组分,并明确了它们的分子量、纯度以及总糖、还原糖、蛋白、硫酸根和糖醛酸的含量。采用自主分离的产褐藻胶裂解酶类芽孢杆菌新种,发酵制备粗酶液,发酵液酶活为15.20U/ml。褐藻胶寡糖对豌豆种子萌发和幼苗生长有促进作用，种子发芽率升高，幼苗高度、根长、生物均有增加。广西褐藻寡糖 企业标准

因此褐藻寡糖对植物的抗逆机制是通过诱导作用实现的。 诱导植物体内产生各种抗性物质来缓解逆境因素对植物造成的损伤，从而达到抗 逆的目的。为了研究褐藻寡糖与细胞的结合机制与作用规律，利用激光共聚焦技术对标 记的寡糖与细胞进行结合，观察其动态结合过程，研究发现，褐藻寡糖能够 与植物的细胞壁进行结合，又可以穿过细胞壁进入细胞内部与细胞膜进行结合。 通过将蛋白酶以及蛋白变性剂 SDS 对膜蛋白进行处理后研究发现能够对寡糖的 结合产生影响。表明褐藻寡糖的结合是与膜上的蛋白有关。通过封闭细胞膜上的 钙离子通道，对其进行阻断后结合寡糖，研究发现，褐藻寡糖与细胞膜的结合与 钙离子通道无关。新疆褐藻寡糖肠道炎症褐藻寡糖可以通过SA信号途径促进NPR1和PR1蛋白基因的表达，使植株获得系统性抗性，增强对病毒的抵抗能力。

AOS增强植株对致病疫霉的抗性用100μg/mLAOS分别喷施拟南芥和本氏烟,24h后,接种致病疫霉。结果显示与喷施ddH2O的植株相比,AOS处理的叶片接种部位的水渍及叶片的黄化程度明显降低,检测致病疫霉菌丝的生长量也明显低于对照,表明AOS也可以增强植株对致病疫霉的抗性。AOS诱导植物早期免疫应答反应对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行相关免疫反应的检测。结果显示,在气孔开度方面,与ddH2O处理的对照组相比,AOS处理的本氏烟叶片的气孔开度明显较低,表明AOS通过调节叶片表面气孔的开合抑制病原菌的入侵。分别于2h、4h、8h、24h和48h时,对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行DAB和NBT组织化学染色,发现喷施ddH2O的叶片染色程度较浅,而喷施AOS的叶片染色程度较深,且在24h时染色深。qRT-PCR检测ROS合成基因RbohA、RbohB以及去除基因SOD、APX和CAT表达水平,显示RbohB基因表达量明显上调,CAT基因表达量明显下降,说明AOS可以通过抑制CAT基因和促进RbohB基因的表达,提高过氧化氢的积累。

研究了在浸麦阶段添加褐藻胶寡糖对大麦发芽力和发芽率、大麦发芽过程中水解酶活力及麦芽质量的影响。结果表明，添加５０ｍｇ／Ｌ褐藻胶寡糖时大麦发芽力和发芽率比对照组分别提高了４６．４％和１２．０％。褐藻胶寡糖能够显著提高大麦发芽过程中α－淀粉酶、β－淀粉酶、蛋白酶和β－葡聚糖酶活力。发芽结束时，添加５０ｍｇ／Ｌ褐藻胶寡糖的α－淀粉酶、β－淀粉酶、蛋白酶和β－葡聚糖酶活力比对照组分别提高了４３．５％、２２．９％、２０．６％和２０．５％。褐藻胶寡糖还能提高麦芽质量，与对照组相比，添加５０ｍｇ／Ｌ褐藻胶寡糖时麦芽的脆度、浸出物质量分数、α－氨基氮质量分数、库尔巴哈值和糖化力分别提高了６．１％、８．０％、２１．２％、７．３％和８．６％，麦芽的β－葡聚糖质量分数和黏度分别降低了２９．２％和１５．４％。褐藻寡糖在植物生长中的使用，可以增强植物对外界环境的适应能力。

    对花叶病毒，通过将寡糖作用于病毒与植株的侵染过程、体内复制阶段进行诱导抗病毒研究，发现褐藻寡糖可以明显提高植株的抗病毒能力，同时还能直接作用于病毒，在体外对其进行钝化，降低传染几率，达到抗病毒的效果。对抗白色粉末病研究，通过体外和体内两条途径对白色粉末病菌进行抗病能力的检测，发现褐藻寡糖不能抑制白色粉末病菌的生长，而是通过提高植株的体内抗逆酶类，达到抗病的效果，其对白色粉末病的好防效为4d，比三唑酮的好防效减少了2d，缩短了白色粉末病的治L时间，降低了的损伤。对植物果实的抗病保鲜的研究，发现褐藻寡糖能够改变草莓的呼吸过程，减少水分散失，降低外界对其造成的损伤。9d后仍能保留一定的鲜度品质。 褐藻寡糖是一种由褐藻多糖（褐藻胶）经过裂合酶降解而获得的小分子量片段。广西褐藻寡糖 企业标准

外源褐藻寡糖可以提高黄瓜幼苗活性氧自由基去除能力，缓解膜脂过氧化的程度广西褐藻寡糖 企业标准

植物在生长发育的过程中会遭受多种病害的胁迫,造成产量和品质下降。植物免疫诱抗剂又称“植物疫苗”,可以通过诱导植物自身的免疫系统激发防御应答反应,增强植物抗病性;且能减少化学农药的使用,降低对人和环境的危害。寡糖类诱抗剂是一类具有生物调节功能的碳水化合物,能在较低的浓度下被植物细胞表面的免疫识别受体所识别进而激发PTI,诱导植物产生一系列的免疫应答,增强植物的抗病能力。前期,我们利用褐藻胶裂解酶Aly2降解褐藻胶得到褐藻胶寡糖。在此基础上,以本氏烟和拟南芥为供试植物,以马铃薯X病毒、烟C花叶病毒和致病疫霉为防治对象,对AOS在诱导植物抵抗病害过程中发挥的作用及其分子机制进行研究。广西褐藻寡糖 企业标准

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