山东褐藻寡糖提取方法

    海藻提取物在作为综合作物营养剂方面受到普遍关注(NorrieandHiltz,1999)，而褐藻酸和褐藻寡糖(AOS)是其中的重要组成部分(Zhangetal.,2019)。褐藻酸由α-L-古罗糖醛酸(G)和β-D-甘露糖醛酸(M)通过1-4糖苷键连接(邰宏博等,2015)，由于其分子量大，性质不稳定等特点，因此应用范围较小(孙哲朴等,2019)。褐藻寡糖是褐藻酸的降解产物，聚合度一般为2-10，可由生物法、化学法、物理法等方法制备得到。褐藻寡糖具有分子量低、性质稳定、水溶性强、安全无毒等特点，在医药、农业、生活日用等方面有更广阔的应用空间(王媛媛等,2010)。如：施用3%的褐藻寡糖可提高小麦种植中氮肥的利用率，进而提高小麦的产量和品质(张朝霞等,2014b)；在水稻培育中施用效提高水稻蛋白质等含量，同时提高产量(张运红等,2016)；在玉米培育中施用，可明显提高玉米的肥料利用率和产量(张朝霞等,2013)。此外，在土壤修复和抗污染方面(张朝霞等,2014a;余劲聪,2016)、水果保鲜方面(蓝炎阳等,2013;陈锋,2014)均有重要应用。褐藻寡糖在植物诱导抗病中有重要作用，因为褐藻寡糖激发植物体内相关抗病信号通路，从而引起植物抗病。山东褐藻寡糖提取方法

   利用高效安全无污染的生物制剂褐藻寡糖外源喷施黄瓜幼苗，将黄瓜幼 苗分为喷施组和未喷施组；再配制不同浓度（0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、） 的褐藻寡糖溶液喷施黄瓜幼苗。对黄瓜幼苗的生长指标，抗氧化酶活性及抗氧化 酶相关基因、WRKY 基因家族对褐藻寡糖应答情况进行测定。旨在探究不同浓 度褐藻寡糖对黄瓜的生长、产量及品质的影响，对褐藻寡糖对作物促进作用的机 理进行了初步研究，探索 WRKY 转录因子和褐藻寡糖在黄瓜生长中的重要功能 及作用机制。褐藻寡糖促进黄瓜幼苗生长发育，主要表现为生物量（株高、茎粗）随 着浓度的升高呈增长趋势，叶片数增多。与未喷施组相比，喷施组生物量均有所 改善。对果期产量也有所提高。云南褐藻寡糖 企业标准褐藻寡糖可以诱导植物气孔关闭，有效抑制病原菌侵染宿主。

    前寡糖在植物促生长与诱导抗逆领域研究的现状，本研究选择不同来 源、不同分子量大小的褐藻寡糖、果胶寡糖和壳寡糖的寡糖片段，通过促生长与 抗逆作用对其生物活性进行比对筛选。以促进植物种子萌发和幼苗生长作为寡糖 片段的促生长指标，以大豆子叶法测定诱导产生植保素的合成作为寡糖片段的抗 逆指标，对寡糖种类、分子量水平和浓度大小与促生长和抗逆效应的影响进行研 究，以获得具有优良的促生长与抗逆性能的寡糖片段。褐藻寡糖 HZ3 在浓度为 0.1%时对豌豆促生长效果为明显，能够明显的促进豌 豆根和芽的生长，增加根和芽的干重。

    AOS对PVX、TMV有较好的防治效果分别在喷施AOS前24h和喷施AOS后24h接种带有GFP标签的PVX。发病后,在紫外灯下观察绿色荧光并检测病毒积累量。结果显示先喷施AOS后接种PVX,5d后,30.6%系统叶片出现荧光,而喷施ddH2O的本氏烟,85.7%上部叶片出现荧光;喷施AOS的本氏烟中病毒的积累量也明显低于对照。先接种PVX后喷施AOS,与喷施ddH2O的本氏烟系统叶片的荧光强度并无明显区别,本氏烟中病毒的积累量也无明显差异。以上结果说明,AOS对病毒有明显的预防效果。用不同浓度的AOS处理本氏烟后接种PVX,检测抗病效果,结果显示在AOS浓度为100μg/mL时,其抗病效果好。之后,采用100μg/mL的AOS喷施本氏烟后,接种烟C花叶病毒（TMV）,发现与对照组相比,AOS处理的叶片上荧光强度也明显减弱,TMV的积累量也明显降低,表明AOS也可以增强植物对TMV的抗性。以上结果说明,AOS增强植物对病毒的抗性具有普遍性。褐藻胶寡糖对植物来说也是一种重要的信号分子，能够参与植物的生长调节和诱导抗病过程。

    可溶性糖、可溶性蛋白是影响蕹菜口感和品质的重要营养成分，它们的含量高低标志着蕹菜的品质高低。叶绿素是光合作用中重要的光合色素，是影响植株干物质积累的主要因素。研究发现，25%的木霉生物肥与75%化肥配施可显著提高蕹菜产量，改善叶菜品质；杨航等(2019)研究发现，的微生物菌肥可明显促进蕹菜生长、提高发芽率、产量和品质，但在浓度下会抑制蕹菜的生长；吴碧珠(2021)以生物有机肥替代部分化肥对蕹菜施用，结果表明生物有机肥可提高蕹菜的株高茎粗产量等指标。本研究结果表明，对蕹菜施加不同浓度的褐藻寡糖除可提高蕹菜的表观数据外，还可明显提升其中的可溶性蛋白、可溶性糖等营养成分；同时可少量提升蕹菜叶片中叶绿素含量。可溶性蛋白、可溶性糖含量的提升有助于提高蕹菜的口感和营养价值；叶绿素含量的提升有助于蕹菜植株干物质的积累，测定结果与蕹菜的表观指标相一致。同时，这一结果也与前人在其他作物，如黄瓜、菠菜(张玉凤等,2014)上的研究结果一致。 褐藻寡糖可以通过促进植物内胼胝质的沉积，提高植物抵抗病原菌侵染的能力。山东褐藻寡糖纯品

褐藻寡糖对植物的抗逆机制是通过诱导作用实现的。山东褐藻寡糖提取方法

    褐藻胶寡糖能够促使大麦克服休眠、激发大麦发芽、加速大麦发芽速率和提高发芽能力，这说明褐藻胶寡糖能够促进谷物种子萌发的激发子。本研究结果表明，在大麦发芽过程中，通过在浸麦过程中添加褐藻胶寡糖能促进水解酶活力的提高，进而使麦芽的溶解性能显著提高，缩短了制麦周期，同时显著提高了麦芽质量和麦汁得率。生物活性寡糖作为外源激发子对种子萌发、植物生长及防御反应具有一定的调节功能。这一结果可能是由于褐藻胶寡糖作为带负电的生物活性寡糖，被植物吸收后，在质外体空间与Ca2＋结合，形成糖－钙复合物，打破植物体内的钙稳定平衡，使胞质Ca2＋浓度增加，从而激发种子萌发相关酶类。此外，还可能通过调控内源激S水平及其平衡来激发种子细胞水解酶活性，终表现为大麦发芽速率的增加和麦芽品质的改善。褐藻胶寡糖具有独特的化学结构，其在细胞表面的接受蛋白、信号传导途径及下游相关基因表达的分子机制还不清楚，有待进一步深入研究。 山东褐藻寡糖提取方法

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