动物本模型可用大、小鼠、兔等实验动物造模,本文小虫主要介绍在小鼠上的造模过程。8周龄,24g体重的C57BL/6小鼠(二)试剂耗材1、实验试剂TNBS、橄榄油、无水乙醇、1mL注射器、软管(可用胆汁插管的软管)、涡旋仪2、试剂配制首先将TNBS溶于水,配制成5%TNBS(w:v)水溶液,然后配制橄榄油与**比例为1(v:v)的均匀混合溶液,使用该混合液将5%的TNBS稀释为1%的TNBS溶液(或首先将TNBS溶于水,配制成(1.5x1.5cm),取配制好的1%的TNBS溶液150μL均匀涂抹在去毛位置,七天后,动物称重并标记,小鼠麻醉后使用1ml注射器通过软管将100μL的1%TNBS缓慢注射进入小鼠直肠内(软管插入直肠的长度大约4cm),小鼠倒立保持约1min,然后将动物放置回笼内,造模后持续观察动物状态,通过DAI评分判定动物成模情况。放血致失血性贫血小鼠模型。湖北大鼠动物模型造模

经多级乙醇至水洗:二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇1min→蒸馏水洗2min;4)苏木素染色5分钟,自来水冲洗;5)盐酸乙醇分化30秒;6)自来水浸泡15分钟;7)置伊红液2分钟。8)常规脱水,透明,封片:95%乙醇(i)1min→95%乙醇(ⅱ)1min→100%乙醇(i)1min→100%乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3:1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性树脂封固。9)显微镜下拍照。结果发现在4个月时,与ctrl(对照)小鼠比较,sixko小鼠的视网膜外核层已经开始变薄,表明感光细胞死亡(图7)。实施例5视网膜冰冻切片免疫染色:取4月龄的由实施例2得到的gm20541基因敲除纯合子小鼠断颈处死后,快速取眼球,并放入4%的pfa中,冰上固定15min后,在角膜上剪口,然后继续冰上固定。2h后,pbs缓冲液冲洗3遍,然后将眼球置于30%蔗糖溶液中脱水2h,然后解剖镜下剪去角膜及晶体,oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷冻。大约10min后,取出oct包埋的眼球,置于冰冻切片机-25℃平衡约30min后即可切片。切片厚度为12μm。切片完成后,选取质量较高的片子于37℃烘箱放置30min,然后免疫组化笔在有视网膜组织的地方画圈,pbs洗三遍以去除oct。湖南兔动物模型故大脑中动脉阻塞(MCAO)模型被用于局灶性脑缺血的研究。

基因/蛋白质表达定性或定量检测在进行分子检测的过程中,保持核酸和蛋白质的完整性至关重要,因此在取样过程中,应尽量避免核酸及蛋白质的降解。如不注意采样过程,将会导致样本中的核酸及蛋白质的无差别降解,严重影响后续分子检测结果。在条件允许的情况下,组织样本在离体后应立刻装入冻存管内,并立即放入液氮中进行冷冻。在RNA提取样本的保存过程中,可以选择非冷冻型RNA保存液或Trizol试剂进行RNA酶的抑制。针对蛋白质提取样本的保存,我们同样可以使用商品化的蛋白酶抑制剂进行短期处理。聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)及免疫印迹(Westernblotting,WB),这两种实验手段是分子生物学检测中不可或缺的一部分,也是发表论文至关重要的分子检测数据。PCR主要用来对基因在基因组层面或转录层面的变化进行定性或定量检测,而WB则主要用来对某一蛋白质的表达进行定量检测。(4)转录组学、蛋白质组学及代谢组学检测随着检测水平及相关产业的不断发展,各类组学检测的价格降低,实验设计中也常常运用组学检测来提升实验设计的档次。在我们进行转录组学及蛋白质组学的检测过程中,同样是要首先确保目标RNA或蛋白质的片段完整性。
动物模型动物疾病模型上海研录(EndotoxinShock,单纯给动物静脉输入细菌及其所致的休克)与临床性(脓毒性)休克(SepticShock)就不完全一样,因此对动物内性休克有效的疗法长期以来不能被临床医生所采用。于是有人向结扎胆囊动脉和胆管的动物胆囊中注入细菌,复制人类性休克的模型,认为这样动物既有又有内中毒,就与临床性休克相似。为了判定所复制的模型是否与人相似,需要进行一系列的检查。例如有人检查了动物压、脉率、静脉压、呼吸频率、动脉血睾丸去势致骨质疏松大鼠模型。

目前常用研究AD的实验动物有非人灵长类动物与啮齿类动物,在选择时遵循“减少、替代、优化”的3R原则。非人灵长类动物与人类的脑部解剖结构、神经病变特点以及生物行为模式相似,尤其是恒河猴,在其脑中观察到含有Aβ沉积的老年斑和神经原纤维缠结现象,无论是自发还是诱发模型,都能够较好的复制AD相关的病理及生理特征,但是昂贵的费用与稀少的资源限制了非人灵长类动物的大量应用。啮齿类动物虽然在病变模拟方面不如非人灵长类动物模型心力衰竭(heart failure)简称心衰,是指由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍。湖北大鼠动物模型造模
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)。湖北大鼠动物模型造模
e:不同光强下gm20541基因敲除小鼠的暗适应视网膜电图b波统计;scotopicamplitude:暗光测定峰值;flashintensity:闪光强度;a-wave:a波;b-wave:b波。图6:光适应视网膜电图(erg)检测结果;图中:a-b:不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图轨迹图;c:20cd·s/m2光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应闪烁(flicker)视网膜电图轨迹图;d:不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图a波统计;e:不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图b波统计;f:20cd·s/m2光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应闪烁(flicker)视网膜电图统计。sixko或cko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠;ctr是指野生型;het是指杂合子。图7:视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠视网膜切片免疫组化染色结果;小鼠年龄:4个月;os:outer-segment(外节);is:inner-segment(内节);onl:outernuclearlayer(外核层);inl:innernuclearlayer(内核层);图中:a:视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠视网膜石蜡切片的h&e染色结果,外核层及内核层均变薄;b:对不同部位的gm20541敲除鼠视网膜外核层厚度统计。图8:视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠ihc染色结果。湖北大鼠动物模型造模