核糖核酸(缩写为RNA,即RibonucleicAcid),存在于生物细胞以及部分病菌、类病菌中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种,即A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。人体一个细胞含RNA约10pg(含DNA约7pg)。与DNA相比,RNA种类繁多,分子量较小,含量变化大。RNA可根据结构和功能的不同分为信使RNA和非编码RNA。非编码RNA分为非编码大RNA和非编码小RNA。非编码大RNA包括核糖体RNA、长链非编码RNA。非编码小RNA包括转移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA(20~300nt)包括miRNA、SiRNA、piRNA、scRNA、snRNA、snoRNA等,细菌也有小分子RNA(50~500nt)。在裂解液上游加入酶裂解步骤(如蛋白酶 K、溶菌酶等)。武汉RNA提取试剂厂家供应

安德鲁·法尔称:“克雷格和我的工作是研究为什么一些基因会停止运行,我们试图去控制它们,我们发现了一些东西可以有效地中止它们。这些基因并不能告诉你它们能做什么,所以如果你能中止它们,你就可以开始了解它们能做什么。不过,较初发现RNA现象的是一位华人学者,非常可惜,他没有进一步弄清这是为什么。”二人发现的是一个有关控制基因信息流程的关键机制。人们的基因组通过从细胞核里的DNA向蛋白质的合成机制发出生产蛋白质的指令,这些指令通过mRNA传送。他们发现一种可以用特定基因降解mRNA的方式,在这种RNA干扰现象中,双链RNA以一种非常明确的方式压制了基因表达。这项技术被用于全球的实验室来确定在各种病症中哪种基因起到了重要作用。武汉RNA提取试剂厂家供应普通的提取实验用国产的试剂盒就足以,价格不高,基本上各地均有现货。

RNA提取试剂的选择:对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点,Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料(叶片、茎、幼苗等)、富含多糖多酚的植物组织材料(果实、种子等)、菌类提取高纯度的TotalRNA,适用范围普遍。按照标准流程,本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂,无需额外购买其它试剂。
细菌RNA快速提取试剂盒:该产品基于独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的去蛋白、漂洗的步骤将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,较后低盐的RNaseFreeH2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。该产品可在30min内完成样品RNA的提取,提取的总RNA完整性好,无蛋白和基因组DNA污染。注意事项:初次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。所有离心操作步骤,均可在室温(15-25℃)下进行。提取细菌RNA需先配制加了溶菌酶或者Lysostaphin的TE(10mMTris-HCl,1mMEDTA),TE中已加入溶菌酶或者Lysostaphin,浓度为1mg/mL。植物RNA提取试剂产品特点:是富含多酚或淀粉的植物组织中,提取高纯度的总RNA。

RNA提取浓度不高或质量不佳原因及解决办法:1、RNA降解:可能是提取样本本身降解,或者是在提取过程中导致的降级;应当尽可能使用新鲜样本进行RNA提取,采集的样本应当及时置于液氮或者-80℃冰箱冻存,并减少反复冻融。在RNA提取过程中应当使用RNase/DNasefree的吸头、离心管及其他材料,提取过程尽可能的快,提取后的RNA应置于冰盒上并及时放于-80冻存。如提取后的RNA需要进行凝胶电泳检测,则应提取好后立刻进行电泳,电泳缓冲液应更换新配制的。2、盐及有机溶剂残留:提取试剂中含有酚及胍盐,洗涤液中含有乙醇,在提取过程中裂解液吸弃不彻底,洗液没有充分晾干导致的,残留的盐及有机溶剂对后续的逆转录和PCR均存在不同程度的压制作用,因此在提取过程中应充分去除组织裂解液,洗涤时应充分,使管壁四周均能被洗涤到,另外管子空离和吹风是必须的步骤,会进一步降低有机物残留。带口罩、帽子,屏住呼吸、不说话,带乳胶手套并要时常更换。武汉RNA提取试剂厂家供应
RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。武汉RNA提取试剂厂家供应
提取RNA的详细步骤:首先,将研钵晾干够,倒入1/3体积的液氮,加入0.2g均质的植物材料,充分研磨后转入一个含有300微升GMT的1.5ml的离心管中,摇匀。然后,加入30微升2mol/lNaAc进行摇匀,加入300微升酸酚摇匀,加入100微升的氯仿摇匀。然后,在四摄氏度12000r/min下离心二十分钟,吸取上清液的3/4,加入等体积的异丙醇,于冰上放置十五分钟。然后,在四摄氏度12000r/min下离心十分钟,将沉淀悬浮于含100微升的4mol/lLiCl小试管中,于-20摄氏度下放置过夜。然后,在4摄氏度13000r/min下离心10-15min,将沉淀溶于0.4mlDEPC处理水中,加入1/2体积氯仿和1/2体积酸酚,摇匀,进行抽提,在4摄氏度13000r/min下离心五分钟。将上清液中加入等体积的氯仿摇匀,进行抽提,在四摄氏度13000r/min下离心五分钟,上清液中加入1/10体积3mol/lNaAc和两倍体积的午睡乙醇与-20摄氏度放置一小时。武汉RNA提取试剂厂家供应
RNA提取真正需要注意的要点:你的植物组织样本采样、保存正常吗?组织裂解充分了吗?组织起始量是否过大?起始量过大的话,他们得带进去多少RNase呀,导致裂解液不能充分压制内源性的RNase,失败就在预料之中!你的细胞活性好吗?细胞都到衰亡期了,你提什么RNA呀;细胞加的那么多,破壁不充分,怎么裂解的好呢,他们本身得带进去多少内源性RNase污染呀!转移液体时吸到沉淀了吗?吸水相时碰到中间层了吗?乙醇干燥净了吗?裂解样本的过程是重中之重液氮研磨(手工):要先加液氮预冷一下研钵,然后研磨,研磨过程要保证研钵中一直有少量液氮,研磨完成一个样本后,直接加入裂解液涡旋震荡后放常温,或者直接丢到液氮中,全...