避免过度浓缩,体积越小,越容易因表面吸附而损失得率。离心后用Tips轻轻吹吸几次滤膜截留的溶液,必要时补加一定体积的缓冲液冲洗膜表面,有助于减少膜表面吸附,能提高回收率。尽量避免Tips接触膜表面。离心管是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。超滤离心管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理.常用于浓缩样品。 超滤离心管通常不需要预处理即可使用,不过对于蛋白质样本处理,特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。超滤离心管通常需要在低温条件下进行操作,以避免目标分子被破坏或失活。衢州超滤离心管
超滤离心管具有快速超滤功能,能够达到较高的浓缩倍数,轻松实现从稀释和复杂的混和样本中浓缩回收目的产物。垂直设计的超滤膜以及较大的有效滤膜表面积有助于快速的样本处理,获得较高样本回收率(通常> 90%) ,并达到30倍的浓缩。根据标称分子量限值(NMWL)的不同,典型处理时间为10-30分钟。超滤膜的垂直设计也较大程度降低了溶质极化造成的滤膜结垢;死体积设计能有效防止过度离心使样本干掉而造成样本损失。收集滤出液后,浓缩样本(截留部分)可通过一个简便的倒置(上下反转)离心步骤而实现高效回收。超滤管未经消毒,只供一次使用。安徽小型超滤离心管生产厂商超滤离心管可以用于分离和纯化各种大分子化合物,如蛋白质、核酸、多糖等。
超滤是大分子脱盐、浓缩较方便的方法,重复性好,得率有保障,已经在蛋白、抗体、病毒、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作;在目前大热的外泌体制备中也已经成为主流方法。超滤管采用离心方式快速处理样品,是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是,在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(AU0.5/4/15)之前,我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得较佳体验,更重要的是,宝贵的样本会遭受本可避免的损失!如果目的蛋白是120kDa,请问应该选择的超滤管规格是100k,50k,还是30k甚至10k?你采用的是1/2,1/3抑或1/6算法?这些没有统一的说法,是因为不同厂家的膜的截留分子量的定义不同。
超滤作为一种膜分离技术,普遍应用于生物样品的浓缩、脱盐和缓冲液置换,其原理是溶液在力的作用下,通过超滤膜孔径的筛滤,大分子量的颗粒被截留下来,而水、溶剂和低分子量溶质则允许透过膜,从而达到浓缩、脱盐和缓冲液置换的目的,这种方法较大的特点是操作简便、快速、高效,可同时浓缩和纯化分子。如何使用超滤心离心管1. 使用角转子加到超滤装置上,较大样本量为15 毫升(Anavo Ultra-15)。2. 将带盖过滤装置放入离心机转子内; 用一个类似的装置来平衡。3. 使用定角转子时,将薄膜面板朝上定位,较大旋转 5000 xg,旋转 30 分钟。4. 为了回收浓缩的溶质,在过滤装置的底部插入一个移液管,通过左右扫动的方式将样品抽离,以保证总回收率。超滤液可贮存在离心管中。说明:为达到较佳回收率,离心后应立即取出浓缩样品。超滤离心管还可以用于分离和提取植物中的活性成分和化合物。
超滤管采用其特有的再生纤维素膜,定义为:一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据:(以0.5mL的AU0.5为例,其它型号截留分子量的选择原则一致,具体离心力和离心时间不同。截留分子量选小啦!看到这个表,你是否发现原来抱怨超滤管流速偏慢的根源来自对于截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子),在再生纤维素超滤膜体系内,选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是较佳选择,这样操作起来又快又好,既保证了样品回收率,又缩短了离心时间,大幅降低大分子损伤风险。超滤离心管适用于从细胞培养基、血浆、尿液等样品中提取蛋白质、核酸、多糖等大分子化合物。杭州100K超滤离心管订做
超滤离心管通常由聚碳酸酯或聚丙烯制成,具有强度高和化学惰性。衢州超滤离心管
可以通过多个超滤管同时超滤来降低浓度,而后者通过改变不同的缓冲液直到没有蛋白质沉淀。用来浓缩蛋白质的。如果要更换缓冲液,当总蛋白溶液浓缩到1毫升左右时,轻轻添加一个新的缓冲液〈用0.22um超滤膜超滤后〉,然后连续浓缩到1毫升左右。浓缩液的之后体积取决于所需的蛋白质浓度,通常不超过500 ul,但也要浓缩到200 ul以下。根据每次至少10次的体积浓度计算,1000次以上的3次基本可以达到更换缓冲器的目的。提取之后浓缩蛋白的操作在冰上进行。黄色设备头(200ul)用于提取之后的蛋白质浓缩物。设备头沿设备头边缘轻轻插入。将蛋白溶液轻轻吹匀。注意不要触摸超滤膜。吸取浓缩液,一次较多吸200 ul,直至耗尽。之后留在管底的浓缩液不需要吸收,否则太困难,可能损坏超滤膜。之后,在无超滤膜的超滤管中加入milliq水,以防止超滤膜干燥。衢州超滤离心管