胰酶中的酚红有哪些作用?酚红在培养基中被用来作为pH指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明:酚红可以模拟固醇类***(特别是雌***)的作用。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,建议用不含酚红的培养基。由于酚红干扰检测,在做流式细胞检测时,也会使用不含酚红的培养基或者胰酶。图 2. Phenol red test图片来源网络8、在做细胞凋亡检测时,细胞为什么不能用含有EDTA的胰酶消化?Annexin V(膜联蛋白)是Ca2+依赖的蛋白,EDTA会螯合Ca2+从而影响Annexin V,进而影响结果,因此需选用不含EDTA的胰酶。建议放入培养箱中进行消化,时间可以长一点。随时观察细胞情况,避免消化过度;也可使用细胞刮刀将细胞刮下,后用***吹匀,比消化简单,还可避免使用胰酶带来的伤害。消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。吉林国产胰酶产品介绍
胰酶操作步骤:
(*供参考) :1. 吸取培养基,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以除去残余的血清。2. 加入适量的胰蛋白酶消化液,略盖过细胞即可。根据细胞的特性可以增加或减少胰酶用量,室温放置30秒至2分钟。(不同的细胞消化时间有所不同)3. 显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状;或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。4. 此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。 广西进口胰酶一般多少钱胰蛋白酶是一种动物源性产品,是培养细胞过程中常用的酶。
胰蛋白酶(Trypsin)简称胰酶,是一种丝氨酸水解酶,能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基端切断。在组织细胞的提取、培养,以及体外细胞培养过程中,均会使用到胰蛋白酶消化液,用于水解细胞间蛋白质,使组织或细胞离散成单个细胞。胰酶在37℃pH8.0条件下消化能力**强。常用胰酶工作浓度为0.25%。EDTA可以螯合钙镁离子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速细胞间连接蛋白的水解,起到增强消化的效果。酚红是一种pH指示剂,溶液偏碱性时呈紫红色,偏酸性时呈橘红色,近中性时呈粉红色。本产品为0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s缓冲液,不含EDTA,无酚红指示剂,经0.22μm过滤除菌。
只断裂赖氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***过程的羧基参胰蛋白酶降解物分析与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**适pH值~。pH>。Ca2+对酶活性有稳定作用;重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**剂对其活性有强烈**。临床用于抗消肿,工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。胰蛋白酶*典标准胰蛋白酶来源含量本品系自猪、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品计算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。胰蛋白酶制法要求本品应从检*合格的牛、羊或猪胰中提取,生产过程应符合现行版《*品生产质量管理规范》的要求。胰蛋白酶性状本品为白色或类白色结晶性粉末。胰蛋白酶鉴别取本品约2mg,置白色点滴板上,加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液,即显紫色。胰蛋白酶检查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法测定(2010年版*典二部附录ⅥH),pH值应为~。溶液的澄清度取本品,加,依法检查(2010年版*典二部附录ⅨB),溶液应澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制备取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(取,混合,pH值为)50ml,温热使溶解,冷却后再稀释至刻度,摇匀。胰酶使用的时候要注意什么?
胰酶消化细胞的原理胰酶消化细胞是一种用来分解细胞质和细胞间物质的化学过程它可以被看成一种简单的动力学过程,它将细胞结合部分的物质分解为其他物质,然后这些留下的物质可以用来维持细胞的高能量水平这种过程通过将脂肪、蛋白质、糖类和其它物质分解为小的离子或者原子小分子的方式来发生。胰酶是细胞分解与吸收物质的一种关键分子,通常有四种类型,它们是肽酶,脂水解酶,载脂蛋白酶和糖水解酶,分别可以将蛋白质、脂肪、脂蛋白和糖类物质分解为更小的离子和分子,以便细胞可以更好地吸收物质,维持其自身的正常功能和形态。淡黄色的胰酶溶液能放心使用吗?吉林国产胰酶产品介绍
EDTA是一种二价金属离子螯合剂,用于结合抑制胰蛋白酶活性的钙离子和镁离子。吉林国产胰酶产品介绍
一、EDTA-胰蛋白酶的配制实验简介:EDTA-胰蛋白酶的配制实验所需的EDTA是乙二胺四乙酸,一种金属螯合剂。它通常与胰蛋白酶结合使用。原因是钙和镁等金属离子会降低胰酶的活性,因此在使用胰蛋白酶消化液时应添加EDTA。它可以螯合这些离子并消除胰酶的**作用。二、EDTA-胰蛋白酶的配制实验所需材料及试剂:PBS,氢氧化钠,EDTA,三、EDTA-胰蛋白酶的配制实验步骤:1.磷酸酶的质量/体积比为%,即将。注意,尽量不要用水溶解,因为必须保持渗透压。%%,可根据细胞消化的难度进行调整。不需要EDTA,可以省略易于消化的细胞。EDTA对细胞粘附有影响,因此应大量使用。如果影响粘附,则必须将其用于消化,在用完全培养基终止消化后,离心并弃去上清液,然后添加完全培养基以进行培养以除去EDTA。如果不影响附着力,则不要离心。。用磷酸酶稀释PBS。4.请注意,血清可以阻止血浆酶的作用,但不能阻止EDTA。对于某些细胞,有必要在消化后停止离心。5.当pH约为8时,磷酸酶和EDTA**易溶解。在制备过程中,您可以先滴几滴氢氧化钠以将pH调整为8。请注意,磷酸酶会使溶液变酸,因此您应随时溶解时测量pH值。调整。请注意,不应添加过量的氢氧化钠,否则电池将无法承受碱的作用。吉林国产胰酶产品介绍