南京细胞DNA提取报价

RNA提取：1.冻存细胞与新鲜细胞的RNA提取有区别吗？具体该怎么操作？新鲜细胞与冻存细胞RNA提取没什么区别。千万不能等细胞溶解了存状态把Trizol直接加到冻存管了，一起化开，振荡振荡就可以了。与从组织中提RNA差不多。2.RNA得率低:该组织或者细胞中RNA含量偏低：不同细胞和组织中RNA的丰度不同，如肝脏，胰腺，心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg)，脑，胚胎，肾脏，肺，胸腺，卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。组织起始量太少或者太多：样品量过少，则细胞组织中RNA含量较低；样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力，裂解将不完全，从而导致RNA得率低。RNA提取需要使用高质量的RNA以获得准确的结果。南京细胞DNA提取报价

骨组织RNA提取方法及步骤：头一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!取1ml裂解液CLB至离心管内(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入100μlP的LANTaid，颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。液氮研磨法:a.骨钳夹碎骨组织后放入研钵（研钵在180度干烤2小时），加入液氮后反复研磨成细粉，注意液氮蒸发后不断补加保存液氮一直存在。b.转移100mg细粉加至预热的裂解液CLB（已加有P的LANTaid）离心管中。立即剧烈涡旋30-60秒或者用吸头吹打混匀裂解直得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。北京细胞DNA提取纯度高RNA提取后可以进行反转录和PCR扩增。

骨组织RNA提取之其它骨组织破碎方法：取出吸附柱RA，放入一个RNasefree离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μlRNasefreewater（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。如果预期RNA产量>30μg，加30-50μlRNasefreewater重复步骤12，合并两次洗液，或者使用首先次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

动物组织块DNA提取：1．组织块解冻，用生理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，放入1.5ml离心管中，剪碎。2．加入0.45mlTES混匀，再加入50ulSDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混匀后，于56°C保温4-6h，每2h摇1次。3．放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），颠倒混匀，10000r/m，离心10m，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。4．加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5ml离心管中。5．加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5ml离心管。6．加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA，观察现象。7．12000r/m，离心10分钟，弃乙醇。8．-20°C保存的75%乙醇洗涤，10000r/m，离心5分钟，去乙醇，55°C干燥DNA。9．加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定），-20°C保存备用。RNA提取可以用于研究RNA的功能和相互作用。

骨组织RNA提取方法及步骤：适用于快速提取骨组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清理柱技术可有效清理电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。骨组织坚硬、骨细胞密度低、而且外周基质含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA难以分离，无法用传统Trizol法进行高质量提取。本方法采用独有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖。同时独特基因组DNA清理柱技术可以有效清理gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，离心沉淀去除多糖和次级代谢产物，然后裂解混合物用乙醇调节RNA结合吸附到基因组DNA清理柱，然后RNA被选择性洗脱滤过，吸附在基因组DNA清理柱上的残留DNA无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清理掉DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，较后低盐的RNasefreeH20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。RNA提取可以用于研究RNA的降解和稳定性。北京细胞DNA提取纯度高

DNA提取的方法有很多种，包括CTAB法、盐法、酚-氯仿法等。南京细胞DNA提取报价

RNA提取和DNA提取实验中常见问题及过程中的注意事项：RNA提取和DNA提取实验在分子生物学中比较常用，但有时会出现产量低、纯度低、易降解等情况，RNA提取和DNA提取实验中常见问题：产量低：如果您遇到的DNA/RNA产量低于您对样品的预期，则需要考虑许多因素。通常，这是一个裂解问题。不完全裂解是产量低的主要原因。它也可能是由不正确的绑定条件引起的。确保使用新鲜的好的乙醇（100%200标准）稀释缓冲液或添加到结合的步骤。劣质乙醇或旧库存可能已经吸收了水分，并且浓度不正确。如果洗涤缓冲液制备不正确，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。南京细胞DNA提取报价

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