荧光标记探针法原理：使用一种特异性的荧光标记探针，它能与目标 DNA 序列杂交。探针的 5' 端标记有荧光报告基团，3' 端标记有荧光淬灭基团。在游离状态下，报告基团发出的荧光会被淬灭基团吸收，无法检测到荧光信号。当 PCR 反应进行时，DNA 聚合酶在延伸引物的过程中，会将探针水解，使报告基团与淬灭基团分离，报告基团发出的荧光信号就可以被仪器检测到。每扩增一条 DNA 链，就会有一个探针被水解，释放出一个荧光信号，荧光信号的强度与 PCR 产物的数量成正比。过程：在 PCR 反应的退火阶段，荧光标记探针会与目标 DNA 序列特异性结合。在延伸阶段，DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性会将探针从 5' 端开始逐个水解，使报告基团游离出来，产生荧光信号。仪器会在每个循环的延伸阶段检测荧光信号的强度，随着 PCR 反应的进行，荧光信号逐渐增强，同样可以得到 Ct 值。定量依据：与荧光染料法类似，通过标准品建立标准曲线，根据待测样本的 Ct 值在标准曲线上计算出起始模板量。由于荧光标记探针具有特异性，能与特定的目标序列杂交，因此可以更准确地对目标基因进行定量分析，减少非特异性扩增的干扰。先进的数据处理算法能去除噪声、校正漂移，精确分析荧光信号变化，提高检测灵敏度。无锡荧光荧光定量PCR仪
ROX原理：主要用于荧光定量 PCR 中的校正和归一化。在反应体系中，ROX 的荧光强度相对稳定，不受 PCR 反应过程的影响。通过检测 ROX 的荧光信号，可以对其他荧光染料的信号进行校正，消除由于加样误差、反应体积差异、仪器波动等因素引起的荧光信号变化，提高定量结果的准确性和可靠性。特点：激发波长约为 570nm，发射波长约为 590nm，荧光颜色为红色。ROX 通常与其他荧光染料如 FAM、VIC 等配合使用，在多重荧光定量 PCR 中，为每个反应孔提供一个稳定的内参荧光信号，以便对不同孔之间的荧光信号进行标准化处理。镇江QPCR荧光定量PCR仪代理商具备多个荧光检测通道，可同时检测多种荧光染料；
荧光定量 PCR 仪是一种精密的仪器，正确的维护和保养可以延长其使用寿命，保证仪器的性能和检测结果的准确性。定期维护：光路系统校准：根据仪器的使用频率和厂家建议，定期对光路系统进行校准，以确保荧光信号检测的准确性。校准过程通常需要使用标准荧光样品和专业的校准工具，由专业技术人员进行操作。温度校准：荧光定量 PCR 仪的温度准确性对实验结果至关重要。定期使用标准温度计或温度校准设备对反应模块的温度进行校准，确保各个孔位的温度均匀性和准确性符合要求。一般建议每 3 - 6 个月进行一次温度校准。更换耗材和部件：根据仪器的使用情况，定期更换易损耗材，如反应板、密封垫、移液器吸头等。对于一些关键部件，如荧光检测模块的灯泡、滤光片等，按照厂家规定的使用寿命进行更换，以保证仪器的性能稳定。软件更新：及时更新仪器的控制软件和数据分析软件，以获得更好的性能和功能，同时修复可能存在的软件漏洞。在更新软件前，要备份好重要的实验数据，防止数据丢失。
以下是一些判断荧光定量 PCR 仪光路系统是否需要校准的方法：熔解曲线异常峰形改变：熔解曲线的峰形变得不规则、宽化或出现多个峰，而样品和实验条件均无变化时，可能是光路系统对荧光信号的检测精度下降，导致熔解曲线的分析结果不准确，此时需要考虑对光路系统进行校准。Tm 值偏移：熔解曲线的 Tm 值（解链温度）与预期值相比出现明显偏移，且排除了引物设计、反应条件等因素的影响，可能是光路系统的荧光检测存在误差，影响了对 DNA 双链解链过程的准确监测，需要对光路进行检查和校准。染料的纯度、荧光量子产率及与核酸的结合特性等很重要。
基因表达分析：可以精确测定不同组织、不同发育阶段以及不同生理状态下基因的表达水平，帮助研究人员了解基因在生物体内的功能和调控机制。例如，研究胚胎发育过程中某些关键基因的表达变化，揭示胚胎发育的分子机制。基因分型：对单核苷酸多态性（SNP）等基因变异进行分型，用于遗传疾病的诊断、药物遗传学研究以及生物进化分析等。例如，通过检测个体在特定基因位点上的 SNP 类型，预测其对某些药物的反应，实现个体化用药。微生物研究：用于对环境中的微生物进行定量分析，了解微生物群落结构和动态变化。例如，研究土壤、水体等环境中微生物的种类和数量，以及在不同环境条件下微生物群落的演替规律，为环境保护和生态研究提供依据。核酸完整性：完整的核酸才能保证 PCR 反应正常进行。镇江JOE荧光定量PCR仪检测
如 FAM、ROX 等常用染料的通道，以实现多重 PCR 检测，同时对多个目标基因进行定量分析。无锡荧光荧光定量PCR仪
荧光定量PCR仪具有高灵敏度、高特异性和精确定量等特点，被广泛应用于多个行业，以下是一些主要的应用行业：食品行业食品安全检测：可检测食品中的致病微生物，如大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，以及食品中的转基因成分，保障食品安全，维护消费者的健康权益。食品溯源：通过对食品中特定 DNA 序列的检测和分析，实现对食品原料的来源追溯和产品质量的全程监控，有助于建立健全食品质量安全追溯体系。环境监测行业微生物群落分析：对环境样品中的微生物进行定量分析和群落结构研究，了解不同环境中微生物的种类、数量和分布规律，评估环境质量和生态系统的稳定性。污染物降解菌检测：筛选和检测环境中具有污染物降解能力的微生物菌株，为生物修复技术提供理论依据和菌种资源，推动环境污染治理和生态修复工作的开展。无锡荧光荧光定量PCR仪
