Lambda核酸外切酶的活性表现在其高度特异性和过程性地消化5'端磷酸化的双链DNA。以下是一些关键点,描述了Lambda核酸外切酶的活性特征:1.**高度过程性(HighlyProcessive)**:Lambda核酸外切酶是一种高度过程性的5'→3'外切酶,这意味着它能够连续消化多个核苷酸,而不需要在每一步之后重新结合底物。2.**底物特异性(SubstrateSpecificity)**:该酶选择性地消化5'端磷酸化的双链DNA链,对单链DNA和非磷酸化DNA表现出低活性。3.**活性定义(ActivityDefinition)**:一个活性单位定义为在37°C下,30分钟内在50μl反应体积中,使用1XLambdaExonucleaseReactionBuffer和1μg声波破碎的双链[3H]-DNA底物,产生10nmol酸溶性脱氧核苷酸所需的酶量。4.**反应条件(ReactionConditions)**:通常在37°C下进行孵育,使用1XLambdaExonucleaseReactionBuffer,该缓冲液包含67mMGlycine-KOH,2.5mMMgCl2,50µg/mlBSA,pH值为9.4。5.**热失活(HeatInactivation)**:通过在75°C下加热10分钟可以使Lambda核酸外切酶失活。6.**特定活性(SpecificActivity)**:Lambda核酸外切酶的特定活性为50,000单位/毫克蛋白。
AdvanceFastPCRMasterMix(2×)与高保真DNA聚合酶之间的具体联系主要体现在以下几个方面:1.**成分**:高保真DNA聚合酶是AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中的关键成分之一。这种酶负责在PCR过程中合成新的DNA链,其保真度决定了扩增过程的准确性。2.**保真度**:AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中的HieffCanace™AdvanceFastHigh-FidelityDNAPolymerase具有高保真度,这意味着在复制DNA时,它能够更准确地维持原始模板DNA的序列,减少错误或突变的引入。3.**酶的活性**:该产品中的高保真DNA聚合酶具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性,这些活性有助于提高PCR扩增的特异性和效率。4.**扩增速度**:高保真DNA聚合酶在AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中提供了快速的扩增速度,如5秒/kb,这有助于减少PCR扩增过程中的非特异性扩增。5.**适用性**:高保真DNA聚合酶使得AdvanceFastPCRMasterMix(2×)能够适用于不同GC含量的基因扩增,包括高GC和低GC区域,提高了PCR的适用性和成功率。
磁珠法质粒小量抽提试剂盒通过一系列优化的步骤来确保从细菌细胞中提取高质量和高纯度的质粒DNA。以下是这一过程的一般步骤:1.**细胞培养**:-首先,将含有质粒的大肠杆菌在适宜的培养基中培养至适宜密度(通常是OD600约0.6-1.2)。2.**裂解细胞**:-使用试剂盒提供的裂解液(含有SDS和可能的其他裂解成分)破坏细菌细胞壁和膜,释放出细胞内容物。3.**吸附磁珠**:-将磁珠加入裂解后的混合物中,磁珠表面修饰有能够特异性结合核酸的配体,使得质粒DNA吸附于磁珠表面。4.**磁分离**:-利用磁力架将吸附有质粒DNA的磁珠从溶液中分离出来,去除未结合的蛋白质和其他细胞碎片。5.**洗涤杂质**:-经过几次洗涤步骤,使用试剂盒提供的洗涤液去除吸附在磁珠表面的蛋白质、RNA和其他杂质。6.**去除洗涤液**:-磁分离后,小心地移除洗涤液,避免磁珠干燥或吸入磁珠,以确保纯度。7.**洗脱质粒**:-使用试剂盒提供的洗脱液(通常是低盐或高pH的缓冲液)将质粒DNA从磁珠上洗脱下来。8.**收集质粒**:-洗脱后的质粒DNA通常在室温或4°C下保存,避免多次冻融,以维持DNA的完整性。
T4UvsX重组酶的保存和纯化是实验室工作流程中的重要环节,确保了酶的稳定性和活性。以下是根据搜索结果提供的信息:保存条件:-T4UvsX重组酶通常在-20°C的条件下保存,可以保持3年的有效期。-某些产品说明中提到,该制品不含甘油,可用于建立冻干体系,这可能对长期保存和运输有额外的好处。-建议避免反复冻融,因为这可能会影响酶的活性。纯化过程:-T4UvsX重组酶是由大肠杆菌表达和纯化的。这意味着科学家首先将T4噬菌体的uvsX基因克隆到适合在大肠杆菌中表达的质粒载体中。-然后将这个质粒转化到大肠杆菌宿主细胞中,使其表达T4UvsX蛋白。-接下来,通过一系列生化步骤从大肠杆菌细胞中提取和纯化T4UvsX蛋白,这些步骤可能包括细胞裂解、离心、层析等技术。注意事项:-T4UvsX重组酶的保存液中甘油含量为20%,建议单独分装保存,以避免反复冻融。-该酶无核酸酶活性,这表明它在催化反应时不会切割DNA链,而是促进DNA链的重组。-本产品用于科研用途,不应用于临床诊断。应用:-T4UvsX重组酶主要用于等温扩增技术,如重组酶聚合酶扩增(RPA),这是一种快速、灵敏的核酸检测技术。通过遵循这些保存和纯化指南,研究人员可以确保T4UvsX重组酶在实验中的有效性和可靠性。使用全长A2AR蛋白进行药物筛选:全长A2AR蛋白可以用于ELISA、SPR亲和分析,以筛选和优化潜在的A2AR调节剂。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一种用于合成互补DNA(cDNA)的试剂盒,它通过逆转录过程从信使RNA(mRNA)或总RNA模板合成cDNA的链。这类试剂盒通常包含逆转录酶(ReverseTranscriptase,RT)和其他必要的组分,以确保高效和准确的cDNA合成。RNaseH-表示该试剂盒使用的逆转录酶缺乏RNaseH活性,这意味着在合成cDNA链的过程中不会发生RNA的降解,从而可以产生更高产量的全长cDNA,特别是从较长的模板(可达13kb)。该试剂盒通常包括以下组分:-逆转录酶,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通过点突变完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor,这是一种重组蛋白,可有效保护RNA在高达55°C的温度下不受RNases的降解。-缓冲液、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他辅助成分,以支持cDNA合成反应。-有时还包括用于去除RNA样品中污染的基因组DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作为PCR或实时PCR的模板直接使用,也适用于第二链cDNA合成或线性RNA放大。此外,可以在cDNA合成过程中加入放射性或非放射性标记的核苷酸,以便在包括微阵列在内的杂交实验中作为探针使用。PNGase F是一种酰胺水解酶,能够特异性地裂解糖蛋白中由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂型的寡糖。dUTP,100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)
PNGase F可以用于从糖蛋白上释放完整的N-连接寡糖链,这在蛋白质组学和糖生物学研究中非常有用。Rat OSM
5'DNA腺苷酰化试剂盒的适用性非常广,主要包括以下几个方面:1.**miRNA克隆**:该试剂盒可用于miRNA等3'端为羟基的RNA或单链DNA在克隆时,3'端添加接头的制备。2.**高通量测序建库**:在高通量测序中,该试剂盒可用于制备5'端腺苷酰化修饰的单链DNA,这些DNA可以用于测序文库的构建。3.**PCR检测**:在PCR检测中,该试剂盒可以帮助制备具有特定5'端修饰的DNA片段,以适应某些PCR应用的需求。4.**单链DNA或RNA的5'端腺苷酰化**:试剂盒可以催化5'端磷酸化的单链DNA或单链RNA转换成5'端腺苷酰化DNA或RNA,无论3'端是否进行了氨基化等封闭。5.**环状DNA生成**:在不存在ATP的条件下,5'DNA/RNAAdenylase可以催化5'端磷酸化的单链DNA生成环状DNA。6.**RNALigation**:该试剂盒包含的MthRNA连接酶,可以用于RNA的连接反应,尤其是在需要5'端腺苷酰化DNA作为连接接头时。7.**科研实验**:所有提到的产品信息都明确指出,5'DNA腺苷酰化试剂盒用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途。Rat OSM
Benzonase核酸酶残留检测试剂盒通过以下方式实现高灵敏性:1.**荧光探针技术**:试剂盒采用荧光标记的DNA探针,这种探针在没有Benzonase核酸酶的样品中稳定存在且不产生荧光信号。当样品中含有核酸酶残留时,核酸酶会切割荧光标记的DNA探针,导致荧光信号的增强。这种变化可以用来定量分析Benzonase的残留量,实现高灵敏度检测。2.**荧光共振能量转移(FRET)**:该技术利用了供体(Donor)和受体(Acceptor)荧光基团间的相互作用。在未切割状态下,供体的荧光被受体淬灭,而一旦DNA探针被Benzonase切割,供体荧光基团与受体分离,荧光信号增强,从而实现高灵敏度的...