T4UvsX重组酶的保存和纯化是实验室工作流程中的重要环节,确保了酶的稳定性和活性。以下是根据搜索结果提供的信息:保存条件:-T4UvsX重组酶通常在-20°C的条件下保存,可以保持3年的有效期。-某些产品说明中提到,该制品不含甘油,可用于建立冻干体系,这可能对长期保存和运输有额外的好处。-建议避免反复冻融,因为这可能会影响酶的活性。纯化过程:-T4UvsX重组酶是由大肠杆菌表达和纯化的。这意味着科学家首先将T4噬菌体的uvsX基因克隆到适合在大肠杆菌中表达的质粒载体中。-然后将这个质粒转化到大肠杆菌宿主细胞中,使其表达T4UvsX蛋白。-接下来,通过一系列生化步骤从大肠杆菌细胞中提取和纯化T4UvsX蛋白,这些步骤可能包括细胞裂解、离心、层析等技术。注意事项:-T4UvsX重组酶的保存液中甘油含量为20%,建议单独分装保存,以避免反复冻融。-该酶无核酸酶活性,这表明它在催化反应时不会切割DNA链,而是促进DNA链的重组。-本产品用于科研用途,不应用于临床诊断。应用:-T4UvsX重组酶主要用于等温扩增技术,如重组酶聚合酶扩增(RPA),这是一种快速、灵敏的核酸检测技术。通过遵循这些保存和纯化指南,研究人员可以确保T4UvsX重组酶在实验中的有效性和可靠性。牛痘DNA拓扑异构酶I具有解超螺旋的活性,可以解开双链闭合环状DNA的超螺旋结构,便于后续的酶切反应。Recombinant Human VSIG4 Protein,His Tag
磁珠法质粒小量抽提试剂盒通过一系列优化的步骤来确保从细菌细胞中提取高质量和高纯度的质粒DNA。以下是这一过程的一般步骤:1.**细胞培养**:-首先,将含有质粒的大肠杆菌在适宜的培养基中培养至适宜密度(通常是OD600约0.6-1.2)。2.**裂解细胞**:-使用试剂盒提供的裂解液(含有SDS和可能的其他裂解成分)破坏细菌细胞壁和膜,释放出细胞内容物。3.**吸附磁珠**:-将磁珠加入裂解后的混合物中,磁珠表面修饰有能够特异性结合核酸的配体,使得质粒DNA吸附于磁珠表面。4.**磁分离**:-利用磁力架将吸附有质粒DNA的磁珠从溶液中分离出来,去除未结合的蛋白质和其他细胞碎片。5.**洗涤杂质**:-经过几次洗涤步骤,使用试剂盒提供的洗涤液去除吸附在磁珠表面的蛋白质、RNA和其他杂质。6.**去除洗涤液**:-磁分离后,小心地移除洗涤液,避免磁珠干燥或吸入磁珠,以确保纯度。7.**洗脱质粒**:-使用试剂盒提供的洗脱液(通常是低盐或高pH的缓冲液)将质粒DNA从磁珠上洗脱下来。8.**收集质粒**:-洗脱后的质粒DNA通常在室温或4°C下保存,避免多次冻融,以维持DNA的完整性。
T4UvsX重组酶的保存和纯化是实验室工作流程中的重要环节,确保了酶的稳定性和活性。以下是根据搜索结果提供的信息:保存条件:-T4UvsX重组酶通常在-20°C的条件下保存,可以保持3年的有效期。-某些产品说明中提到,该制品不含甘油,可用于建立冻干体系,这可能对长期保存和运输有额外的好处。-建议避免反复冻融,因为这可能会影响酶的活性。纯化过程:-T4UvsX重组酶是由大肠杆菌表达和纯化的。这意味着科学家首先将T4噬菌体的uvsX基因克隆到适合在大肠杆菌中表达的质粒载体中。-然后将这个质粒转化到大肠杆菌宿主细胞中,使其表达T4UvsX蛋白。-接下来,通过一系列生化步骤从大肠杆菌细胞中提取和纯化T4UvsX蛋白,这些步骤可能包括细胞裂解、离心、层析等技术。注意事项:-T4UvsX重组酶的保存液中甘油含量为20%,建议单独分装保存,以避免反复冻融。-该酶无核酸酶活性,这表明它在催化反应时不会切割DNA链,而是促进DNA链的重组。-本产品供科研用途,不应用于临床诊断。应用:-T4UvsX重组酶主要用于等温扩增技术,如重组酶聚合酶扩增(RPA),这是一种快速、灵敏的核酸检测技术。通过遵循这些保存和纯化指南,研究人员可以确保T4UvsX重组酶在实验中的有效性和可靠性。
T4UvsX重组酶是一种来源于T4噬菌体的酶,它是RecA/Rad51家族的同源体。这种重组酶在双链DNA断裂的修复和复制叉重新启动的过程中起到重要作用。T4UvsX重组酶可以通过与其他DNA结合蛋白或辅助因子一起与单链DNA形成核酸蛋白复合物,并通过寻找与靶标DNA的互补区域进行杂交,以完成链置换反应。此外,T4UvsX重组酶在生产时由大肠杆菌表达和纯化。T4UvsX重组酶的产生过程涉及到基因工程和蛋白质表达的常规技术。首先,T4噬菌体的基因序列被识别并克隆到适合的表达载体中,然后这个载体被转化到大肠杆菌宿主细胞中。在宿主细胞内,T4UvsX基因被转录和翻译,产生重组酶蛋白。随后,通过一系列步骤包括细胞培养、蛋白质表达、细胞裂解、蛋白质纯化等,获得所需的T4UvsX重组酶。这一过程通常在生物技术实验室中进行,并且需要精确的分子生物学操作和蛋白质工程知识。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中的逆转录酶(ReverseTranscriptase,RT)具有一个关键特性:它们通过特定的突变消除了RNaseH活性。RNaseH是一种通常与某些逆转录酶相关的酶活性,它能够降解RNA。然而,在1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中,逆转录酶被设计成不具有这种降解RNA的能力,从而在合成cDNA的链时保护RNA模板不被降解。以下是1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中逆转录过程的一般步骤,以及如何避免RNA降解:1.**RNA模板准备**:首先确保RNA模板的纯度和完整性,避免DNA污染。可以通过DNaseI处理去除RNA样品中的DNA污染。2.**混合反应组分**:将RNA模板、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)、逆转录引物(如oligo(dT)或随机引物)和缓冲液混合。3.**逆转录酶添加**:加入经过突变处理的逆转录酶,这种酶缺乏RNaseH活性,因此不会在合成过程中降解RNA。4.**逆转录反应**:在适宜的温度下进行逆转录反应,逆转录酶根据RNA模板合成cDNA链。5.**终止反应**:通过加热至一定温度来终止逆转录反应。FnCas12a的双链或单链DNA靶标都能激发其反式剪切活性,即在形成三元复合物后,针对非特异序列ssDNA的剪切。Recombinant Mouse RGM-C Protein,His Tag
利用His标签通过亲和层析从细胞裂解物中纯化目标蛋白,然后可能通过离子交换层析、等方法进一步提纯。Recombinant Human VSIG4 Protein,His Tag
DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术,用于分离、鉴定和定量DNA片段。以下是关于DNA琼脂糖凝胶电泳的一些关键点:1.**原理**:-利用琼脂糖凝胶作为介质,DNA片段在电场作用下根据其大小和电荷差异进行分离。较小的DNA片段迁移速度快,而较大的片段迁移速度慢。2.**琼脂糖**:-一种由琼脂糖粉末和缓冲液(如TAE或TBE)混合制成的凝胶。琼脂糖浓度通常在0.7%到2%之间,浓度越高,分辨率越高,但凝胶孔隙越小,迁移速度越慢。3.**样品准备**:-DNA样品通常需要在加载前进行适当的处理,如纯化、稀释,有时还需添加样品缓冲液以保证样品在电泳过程中的稳定性。4.**加载样品**:-使用微量移液管将样品和加载缓冲液(通常含有追踪染料,如溴酚蓝)混合后,小心地加载到凝胶孔中。5.**电泳**:-将凝胶置于电泳槽中,连接电源,施加恒定电压进行电泳。电压和时间根据凝胶浓度和所需分辨率进行调整。6.**染色**:-电泳完成后,为了可视化DNA条带,通常使用荧光染料如EB(溴化乙锭)或SYBRGreen进行染色。染色后的凝胶在紫外光下观察,DNA条带会发出荧光。7.**分析**:-通过比较DNA条带的位置和已知大小的DNA标准品(DNAladder),可以估计DNA片段的大小。
pA-MNase(蛋白A-微球菌核酸酶)在以下实验中特别有用:1.**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:这是一种用于研究蛋白质-DNA相互作用的技术,pA-MNase在此技术中用于在免疫沉淀后切割染色质DNA,以分析特定蛋白质与DNA的结合位点。2.**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:这是一种蛋白质-基因组互作研究技术,pA-MNase在此技术中用于在目标蛋白质被抗体识别后,通过核酸酶活性切割附近的DNA,从而释放与目标蛋白质相互作用的DNA片段。CUT&RUN技术相比传统的ChIP-S...