One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (UDG Plus)

在分子生物学研究中，核酸染色是检测DNA和RNA的关键步骤，而溴化乙锭（EthidiumBromide,EB）作为一种经典的荧光染料，因其高效性和灵敏性被广泛应用于核酸电泳、荧光分析等领域。产品特点高灵敏度与特异性EB是一种多环芳烃荧光小分子，能够特异性地嵌入双链DNA和RNA中。结合后，其荧光强度增强，双链RNA和双链DNA的荧光强度分别可增强21倍和25倍。这种特性使得EB能够检测到低至10ng的DNA条带，非常适合用于微量核酸的检测。多种应用EB不仅用于琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳中的核酸染色，还可以作为DNA聚合酶抑制剂，用于核酸的荧光分析实验。此外，EB还可与吖啶橙联合使用，用于区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。便捷的使用方法10mg/ml的EB溶液是一种预制的储存液，使用时只需稀释至工作浓度（通常为0.5µg/ml），即可用于电泳前或电泳后的染色。例如，在琼脂糖凝胶制备时，每100mL胶液中加入2-5µL的10mg/mlEB溶液即可。稳定的储存条件10mg/ml的EB溶液在室温下避光保存即可，有效期可达1-2年。这种储存条件使得EB溶液在实验室中易于保存和管理。FnCas12a不仅可用于体外dsDNA的特异剪切，也可用于靶标核酸的快速检测，如HOLMES核酸快检技术。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (UDG Plus)

5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能够从DNA链的5'端向3'端切除核苷酸的能力。这种活性通常用于修复受损的DNA或去除错误配对的核苷酸。具体来说，5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成过程中切除前方的核苷酸，帮助错误或不需要的序列，从而确保DNA的正确复制和修复。在DNA聚合酶中，5'-3'外切核酸酶活性与聚合酶活性相辅相成。聚合酶在合成新链时，5'-3'外切酶活性可以在发现错误时进行修正，确保合成的DNA链的准确性。例如，E.coliDNA聚合酶I具有这种外切酶活性，可以在合成过程中去除错误的核苷酸，从而提高DNA的保真度。需要注意的是，BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性，这使得它在某些应用中更为稳定，特别是在等温扩增反应中，如LAMP（环介导等温扩增）和RCA（滚环扩增）等。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (UDG Plus)中间的催化结构域以及 C 端结构域，这种多结构域的组成使 Tn5 转座酶能精细地与 DNA 相互作用并发挥其功能。

BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物学实验中都是常用的酶，但它们之间存在一些关键的不同点：1.**来源和热稳定性**：-**TaqDNA聚合酶**来源于嗜热菌Thermusaquaticus，具有很好的耐热性，能够承受PCR的热变性步骤。-**BstDNA聚合酶**来源于嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillusstearothermophilus），同样具有较高的热稳定性，适用于等温扩增，如LAMP技术，无需PCR热循环。2.**酶活性**：-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性，但没有3'-5'外切酶活性。这意味着它在DNA合成过程中可以校正一些错误，但保真性相对较低。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和强链置换活性，但缺乏5'-3'外切酶活性。这使得它在等温扩增中更为有效，尤其是在需要高保真度和快速扩增的应用中。3.**应用领域**：-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技术，适用于各种DNA片段的扩增，包括复杂模板和长片段的扩增。-**BstDNA聚合酶**特别适用于等温扩增技术，如LAMP，这些技术不需要温度循环，适用于快速、低成本的DNA扩增。4.**扩增速度和效率**：-**BstDNA聚合酶**在等温扩增中显示出比传统TaqDNA聚合酶更快的扩增速度和更高的产量，尤其是在优化的LAMP反应中。

一、强大的耐受性和兼容性Plant Direct PCR Master Mix (2×)(Without Dye) 使用了经过定向进化改造的DNA聚合酶，这种酶对植物样本中的多糖、多酚等PCR抑制物具有极强的耐受性。即使在样本经过简单裂解后，也能高效地进行DNA扩增，适用于多种植物物种，包括拟南芥、小麦、水稻和玉米等。此外，该预混液的扩增性能好，能够扩增长达5 kb的DNA片段，适用于各种植物样本的直接扩增。二、快速便捷的操作流程该预混液为2倍浓度的反应体系，包含DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺和优化的缓冲体系，只需加入模板和引物即可进行反应。其独特的裂解缓冲液能够在短时间内裂解植物组织，释放出可用于PCR的基因组DNA。这种“直接扩增”的方式不仅节省了时间，还减少了因DNA提取过程中的损失和污染。三、稳定性和重复性Plant Direct PCR Master Mix (2×)(Without Dye) 经过严格的质量控制，即使在反复冻融50次后，活性仍保持稳定。其优化的配方和稳定的酶体系确保了实验结果的高度重复性，适合高通量筛选和大规模样本分析。Pfu DNA Polymerase的突变体研究：通过研究Pfu DNA Polymerase的突变体，可进一步优化其性能和应用范围。

T5核酸外切酶在基因克隆中的优势主要体现在以下几个方面：1.**高效性**：T5核酸外切酶依赖性组装（TEDA）方法在常规克隆中的效率与使用专有DNA聚合酶的商业In-Fusion方法相似，但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA连接酶的Gibson方法。2.**低成本**：TEDA方法每个反应使用0.04U的T5核酸外切酶，价格为0.25美分，具有很高的成本效益。3.**简单性**：TEDA方法的反应混合物非常简单，易于操作，这使得它在预算有限的实验室中尤其有用。4.**灵活性**：TEDA方法能够组装多个DNA片段，并在多个位点同时进行定点诱变，提供了一种灵活的克隆和突变方法。5.**阳性克隆率**：使用T5核酸外切酶的无缝克隆技术可以确保100%的阳性克隆率，这提高了实验的成功率。6.**协同作用**：在无缝克隆中，T5核酸外切酶与Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA连接酶协同作用，通过切割、填补和连接三个步骤，高效地完成DNA片段的连接。7.**减少污染**：T5核酸外切酶可以降解碱裂解提取质粒中的变性DNA，减少超螺旋DNA的污染，提高DNA克隆和转染效率。这些优势使得T5核酸外切酶成为基因克隆中一个非常有价值的工具，尤其是在需要高效、低成本和操作简便的实验环境中。在一项研究中，比较了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑马鱼基因组编辑中的效率。Recombinant Rhesus RANTES/CCL5

来源于Francisella tularensis：FnCas12a是一种来源于Francisella tularensis菌株的核酸内切酶。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (UDG Plus)

高灵敏度与特异性该试剂采用了优化的反应缓冲体系和抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶，能够显著提高扩增效率和特异性。即使在低拷贝数的模板条件下，也能实现稳定检测，例如某些产品可在3 copies/反应的水平下实现稳定检出。此外，该试剂还通过添加抑制非特异性扩增的因子，进一步提升了多重反应的准确性。2. 高效的多重检测能力Multiplex Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus) 支持在同一反应体系中进行多达四重的靶基因检测。这种多重检测能力极大地提高了实验效率，减少了样本用量和检测时间，特别适用于需要同时检测多个基因或病原体的场景。3. 强大的防污染系统试剂中包含的dUTP/UDG系统能够有效防止PCR产物的气溶胶污染，从而避免假阳性结果的出现。UDG酶在室温下即可发挥作用，确保实验数据的准确性和可靠性。4. 快速扩增与操作简便该试剂支持快速扩增程序，可在短时间内完成qPCR反应，例如某些产品可在35分钟内完成45个循环。同时，2×预混液的设计使得实验操作更加简便，只需加入模板、引物和探针即可进行反应。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (UDG Plus)