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    ***代测序技术1975年由FrederickSanger所提出的链终止法以及1977年由WalterGibert所发明的链降解法被称为***代测序技术。1977年，WalterGilbert和FrederickSanger发明了***台测序仪，并应用其测定了***个基因组序列，噬菌体X174，全长5375个碱基。WalterGilbert和FrederickSanger也因在测序技术中的贡献获得了1980年诺贝尔化学奖。技术原理目前，基于***代测序技术的测序仪几乎都是采用Sanger提出的链终止法。链终止法测序的**原理是ddNTP的2'和3'端都不含羟基，因此在合成核酸链的过程中无法形成磷酸二酯键，从而导致DNA合成反应中断。在测定待测核酸片段的序列时，向反应体系中加入一定比例的带有放射性同位素标记的4种ddNTP，利用DNA聚合酶来延伸结合在待测核酸模板上的引物，直到掺入一种链终止核苷酸为止，**终会得到一组长度各相差一个碱基的链终止产物，这些产物可通过高分辨率变性凝胶电泳分离并根据其长度排序，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影进行检测，从而确定目的核酸片段各个位置的碱基。完整的测序过程分为4步：：如要利用Sanger测序方法进行完整基因组的测定，首先要将提取得到的样品完整DNA打碎，形成DN**段，如只是测定单个目的基因的序列。 迈杰转化医学针对药物研发过程中靶点、适应症及PD研究中生物标志物等研究的进行方案开发设计。河北多基因联合检测迈杰转化医学NGS平台值得推荐

    PacBio技术的优缺点PacBio技术的优点：无需PCR扩增，不会人为的引入突变；超长读长，平均读长可达到10Kb，**长读长可以达到40Kb；覆盖均匀，无GC偏好性；通过reads的自我矫正，10X以上准确率能够达到；可以直接检测到甲基化信息，同步进行表观遗传学识别。PacBio技术的缺点：单条序列错误率较高，平均核苷酸准确性不到85%；测序成本较贵。PacBio技术的应用基因组组装利用PacBio测序平台，可以克服部分序列GC含量高或重复序列多等问题，更好的进行基因组详细描绘，从而进行精细的基因注释等研究。PacBio测序平台不需要进行PCR扩增，因此可以减少基因组组装过程中的人为错误和偏差。PacBio测序平台读长较长，因此相比二代测序拼接结果更为准确，同时可以利用其长片段来填补二代数据组装中产生的gap和连接contig为scaffold。全长转录组测序利用PacBio测序平台读长较长的特点，进行转录组测序可以直接得到转录本的全长序列，省去了二代测序的拼接过程，使得过程更为简便，结果更为准确。 河北多基因联合检测迈杰转化医学NGS平台值得推荐迈杰拥有StarLIMS实验室信息化管理系统，中心实验室获得了中国CNAS ISO 17025实验室认可、美国CAP认证。

    甲基化分析PacBio测序的技术原理可以直接检测到发生甲基化的核苷酸，因此可以在进行其它测序分析的同时完成DNA甲基化的分析。Nanopore技术测序原理将在某一面上含有一对电极的特殊脂质双分子层置于一个微孔之上，该双分子层中含有很多由α溶血素蛋白组成的纳米孔，并且每个纳米孔会结合一个核酸外切酶。当DNA模板进入孔道时，孔道中的核酸外切酶会“抓住”DNA分子，顺序剪切掉穿过纳米孔道的DNA碱基，每一个碱基通过纳米孔时都会产生一个阻断，根据阻断电流的变化就能检测出相应碱基的种类，**终得出DNA分子的序列。Nanopore技术的优缺点Nanopore技术的优点：可以检测结构变异和可变剪切；能直接对RNA分子进行测序；能对修饰过的碱基进行测序；测序读长更长，可以达到150kb；测序数据可以做到实时监控；运行速度快。Nanopore技术的缺点：采用的是水解测序法，不能进行重复测序，因而无法达到一个满意的测序精确度。Nanopore技术的应用基因组组装利用其测序长的特点，可以填补基因组中大片段的gap。临床应用对于临床实践，实时获取和分析DNA/RNA序列是一件很重要的事情，对于传统的高通量测序，做到这一点非常困难，但对于Nanopore技术平台，实现实时获取序列相对容易。

    于是，每个反应会产生许多不同长度的DN**段，并在模版的任一核苷酸位置上由其中一种双脱氧核糖核苷酸终止链的延伸。反应混合物可以通过手动灌胶或自动灌胶到用毛细管进入测序机器，再根据DNA分子大小不同用电泳分离DNA。当DNA流过凝胶后，DNA序列可以通过双脱氧核糖核苷酸上发出的荧光来进行分析。当今的Sanger测序仪使用的是毛细管自动上样的凝胶电泳，一般可以同时分析8-96个系列反应。二代测序系统在十年前就是因其可同时进行大量平行测序反应而广为人知。这些系统可以同时分析百万甚至上亿个序列反应。虽然不同的机器生产时会在技术细节上有许多不同，但他们都有以下几个共同点：1,文库建立：所有二代测序的平台都需要一个基因文库，这个基因文库包含通过引申或者连接自定义的接头序列。2,测序仪器：每个文库片段在共阶吸附的DNA连接因子的作用下，以文库适配序列为模版，在固体表面上进行扩增。这步扩增会产生许多DNA蔟，每个来源于一个文库片段，每个基因蔟都会像**的测序反应一样起作用。3,数据输出：每个仪器都会在测序结束后给出原始数据。这个原始数据时每个基因蔟中形成的DNA序列的**。作者：丽舍咨询链接：源：知乎著作权归作者所有。 迈杰转化医学拥有专业的病理医生提供相应的阅片或远程病理阅片服务。

    包括67个y-str基因座和1个性别决定基因座amelogenin)。相比于illumina公司的forenseqtmdnasignatureprepkit，本发明提供的试剂盒中包含41个新的y-str基因座，能提供更多新的遗传信息。而且本发明提供的复合扩增体系中所有y-str基因座的**大扩增子长度都小于300bp，而forenseqtmdnasignatureprepkit中有约％(7/24)基因座的**大扩增子长度大于300bp，不利于降解检材的分析。本发明提供的试剂盒是本发明的发明人经过大量实验摸索获得的，试剂盒中的引物具有不可替换性；即引物被替换后，部分基因座将会被抑制且抑制效果不可预知。实验证明，采用本发明提供的试剂盒检测标准品2800m中68个基因座的str分型，分型结果准确。本发明具有重要的应用价值。附图说明图1为67个y-str基因座的pcr扩增产物的长度范围分布。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。标准品2800m为promega公司的产品，产品目录号为dd7251。 迈杰转化医学目前已完成约30+靶点的方法学验证，50+靶点的方法学建立。山西组织标本迈杰转化医学NGS平台服务至上

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    二代测序是一个强大的功能平台，它可以同时给数以万计的DNA分子进行测序。由于这种可以多个样本同时测序的能力，在个性化医疗、遗传疾病和临床诊断等方面，二代测序也就是高通量测序开创了**性的领域。早在1900年代就发明的Sanger测序法，成为了DNA测序的黄金法则，即便到了***它仍被***用来进行常规测序和NGS数据的验证。它利用高保真DNA聚合酶生成与单链DNA模版互补的拷贝。在每个反应中，一个可以特异性识别模版的单链引物，可以从3端开始启动DNA合成，根据碱基互补配对原则，脱氧核糖核苷酸或简单的核苷酸是一个接一个的与模版配对。每个反应还包含四种双脱氧核糖核苷酸的混合物，每一种对应一个DNA碱基。这些双脱氧核糖核苷酸与DNA单体十分类似，因此可以参与DNA链的增长，但是他们和天然的脱氧核糖核苷酸有两点不同：（1）他们缺少一个会影响DNA链进一步衍生的3’羟基。在DNA延伸过程中，这个3’羟基一旦加入DNA分子中就会导致链的终止；（2）每个双脱氧核糖核苷酸都有独特的荧光染料吸附，使得DNA测序的自动检测得以进行。 河北多基因联合检测迈杰转化医学NGS平台值得推荐