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    除非整个家族的结直肠ai发病率明显上升，否则很难发现单个个体携带者。因此，从MSI-H结直肠ai中筛选出可疑的Lynch综合征患者，不*有利于患者本人的liu***和预防筛查策略的制定，而且有利于发现Lynch综合征家系，为患者家族成员的liu预防提供重要信息。与以往以家系调查和临床信息为主导的筛查方法比，采用分子检测等辅助手段对本病进行筛查不*准确且更高效和可行。研究表明，如果严格按照修订的Bethesda指南进行MSI检测，将遗漏％的MSI结直肠ai和％的Lynch综合征。因此，E***P工作组(EvaluationofGenomicApplicationsinPracticeandPreventionWorkingGroup)推荐对所有(或<70岁)的新诊断所有(或<70岁)的新诊断结直肠ai结直肠ai进行MSI检测(图4)。五、小结与展望MSI结直肠ai占结直肠ai的15％，因其具有独特的发生机制、预后、***方案以及与Lynch综合征的密切关系而日益得到重视。目前，国际上很多大型医院和liu***中心均已开始采取对所有新诊断的结直肠ai进行MSI和／或免疫组织化学检测的策略，有的机构甚至开始对所有新诊断的子宫内膜ai也进行***检测。我国结直肠发病率持续上升，但对MSIliu和Lynch综合征进行筛查的观念尚待普及。分子机制的研究进展和检测手段的进步。迈杰转化医学具体包括全套的Leica组织样本制备系统，Ventana、Leica、DAKO等全自动免疫组化仪。贵州dMMR抗体检测试剂经验丰富

MSI和dMMR检测的临床应用

•实体瘤免疫(PD-1和CTLA-4)患者的选择

•2017年5月23日，美国FDA批准了默克公司的Keytruda（pembrolizumab）应用于高度微卫星不稳定性（MSI-H）或错配修复缺陷（dMMR）的实体liu患者

•2017年8月1日，FDA批准百时美施贵宝的Opdivo（nivolumab）可应用于***氟嘧啶，奥沙利铂和伊立替康***后疾病进展的MSI-H或dMMR的转移性结直肠liu患者

•MSI和dMMR的传统临床应用

•用于结直肠liu和子宫内膜liu患者林奇综合征（HNPCC）的筛查（98%美国临床实验室）

•用于结直肠liu患者的预后指标，MSI-H患者预后较好（美国临床实验室占48%）

•作为结直肠liu患者辅助化疗(5-FU和Irinotecan)的用药指导 江苏专注dMMR抗体检测试剂经验丰富经多平台平行验证（MSI-PCR、MSI-NGS)，一致性高，特异性好.

    当liu细胞出现一种或几种错配修复蛋白核表达的丢失，则提示liu为MSI-H。MLH1和MSH2作为错配修复复合体的共用亚单位，在发生功能缺陷时常同时伴有其同源错配修复蛋白的表达缺失。另外，如前所述，部分Lynch综合征是由于EpCAM基因胚系突变导致下游MSH2基因功能缺陷所致。Musulen等发现，在MSH2表达缺失的liu中检测出EpCAM蛋白缺失，与EpCAM基因突变的吻合率达100％，所以推荐将EpCAM免疫组织化学检测加入到Lynch综合征的筛查流程中。日常工作中用于鉴别肺腺ai与恶性间皮瘤的抗体Ber-EP4即是检测EpCAM的常用克隆之一。免疫组织化学检查错配修复蛋白表达缺失的作用如下：(1)提示哪个错配修复基因发生了功能缺失(表1)；(2)与MLH1启动子甲基化检测和／或BRAFV600E突变检测结合，区分散发性MSI-H结直肠ai和可疑Lynch综合征患者；(3)与EpCAM免疫组织化学检查结合，为后续的Lynch综合征遗传学突变检测提示方向。目前，4种主要的错配修复蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均已有稳定的商品化抗体，但受组织固定、染色条件、抗体克隆号不同等因素的影响，可能会出现假阳性或假阴性结果。在判读免疫组织化学染色结果时应注意：(1)内对照是否阳性；(2)着色部位是否为细胞核；。

    筛选出分泌特定单克隆抗体的杂交瘤细胞株abm58060-20a2-pu。将此细胞株转入t-75培养瓶中扩增至对数生长期保种或进行后续实验。实施例3腹水诱生法制备单克隆抗体一、腹水制备对数生长期细胞用无血清培养基洗涤并悬起，计数～5×105，1ml。悬浮的细胞腹腔注射事先用石蜡油致敏的小鼠。7天后开始收集腹水。取出的腹水于4℃离心4000rpm，10min。小心吸出中间的腹水收集于离心管中，4℃或-20℃保存。二、单克隆抗体的纯化用hitraprproteinaff(ge公司)亲和层析法按说明书从腹水中纯化抗体。sds-page胶鉴定纯度，bradford法测定浓度。纯化的抗体保存于-20℃。实施例4单克隆抗体特性鉴定一、亚型鉴定用100mmpbs()稀释包被羊抗鼠igg(北京中杉金桥生物技术有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，过夜。倾空液体，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封闭液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，37℃孵育1h。倾空液体，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。倾空液体用pbs-t清洗3次。用封闭液1：1000稀释hrp标记的羊抗鼠(κ,λ)抗体或1：2000稀释hrp标记的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗体，37℃孵育1h。倾空液体，用pbs-t清洗3次。迈杰转化医学希望能和创新型药企共同探索创新生物标志物的临床应用潜力。

    选择靠近n末端的氨基酸区域1-100位氨基酸序列与gst蛋白融合表达为抗原片段，抗原片段的dna编码序列为seqid**。二.重组msh6蛋白片段的表达和纯化将seqid**的dna序列直接合成并克隆进克隆载体质粒puc57(南京金斯瑞生物科技有限公司)。该dn**段5’端和3’端分别带有ecori和xhoi酶切位点，取5μl(约1微克)带有msh6片段的质粒puc57-msh6和用作载体的pet30a-gst(merck)5μl(约1微克)分别进行双酶切，酶切体系为：ecori(takara)1μl，xhoi(takara)1μl，5μl10×bufferh，38μlddh2o，37℃酶切三小时。酶切产物经1％琼脂糖电泳，柱离心式dna回收试剂盒(北京华大蛋白质研发中心有限公司)切胶回收基因和载体片段。取2μl回收的线性化载体，3μl酶切回收的msh6基因片段，5μl2×ez-ligt4dna快连试剂(北京华大蛋白质研发中心有限公司)，混匀，室温连接三十分钟。取出-80℃保存的感受态细胞(bl21)，解冻后加入连接产物，冰上放置30min。42℃热激90秒后冰浴2min后，加入800μl无抗性的lb培养基。37℃复苏培养20min，涂板。从转化的平板挑单克隆到，37℃，200rpm培养，dna测序(北京华大基因)。将测序正确的克隆菌液2ul活化的菌液到5mllb液体培养基中，37℃，200rpm，培养。迈杰转化医学围绕生物标志物研究、伴随诊断开发，建立了完善的核酸组学、蛋白组学、细胞组学技术平台。重庆专业dMMR抗体检测试剂服务至上

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    MSI-H结直肠ai的比例(22％)高于Ⅲ期结直肠ai(12％)，而在Ⅳ期liu中*占％，提示MSI-H结直肠ai发生转移的风险较低。特别是在Ⅱ期结直肠ai患者中，MSI状态是提示预后的**预测因子，MSI-Hliu预后好于MSSliu。Ⅱ期结直肠ai复发的高危因素包括：liu组织学类型为低分化ai、有脉管／神经侵犯、淋巴结检出数量不足12个、发生梗阻或穿孔以及切缘阳性，但如liu为MSI-H型，则低分化不属高危因素。2．指导***：研究发现，MSI-H结直肠ai对5-氟尿嘧啶和顺铂等化疗药物不敏感，而对伊立替康等化疗药物敏感，同时MSI结直肠ai对放疗比较敏感。美国国立综合ai症网络(NCCN)的结直肠ai临床实践指南明确指出，对MSI-H结直肠ai不宜采用5-氟尿嘧啶和铂类为主的***方案。3．Lynch综合征患者筛查：Lynch综合征患者较常见同时性或异时性多发结直肠ai，如果术前能明确Lynch综合征的诊断，外科医师有可能采取更为***的切除术式。Lynch综合征患者不*发生结直肠ai的风险增高，而且可以发生子宫内膜ai、卵巢ai、尿路上皮ai等多种肠外恶性liu，有研究表明，阿司匹林能够预防Lynch综合征相关结直肠ai及肠外liu的发生。由于Lynch综合征与大家熟知的家族性腺瘤**肉病(FAP)不同。贵州dMMR抗体检测试剂经验丰富