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    染色体STR不属于测序技术的，它是一类分子检测技术，例如Y染色体-STR，一般通过PCR、电泳凝胶结合来分析这段串联重复序列的存在或者多态性，常用来检测性别或亲子鉴定，而不能测出具体的DNA序列信息。测序技术是一代测序（sanger测序）、二代测序（高通量测序）、三代测序（单分子测序）为基础的。二代测序的缺点主要是由其PCR边复制边读取的原理决定的，测序时间长，读长短，末端质量差。三代测序中PacBio实际上就是针对这些缺点的升级，通过巧妙的微孔设计实现单分子读取，而且可以屏蔽游离dNTP的信号，不用每读取一次就要清洗—添加一次dNTP，所以读长比较长，测序速度快。就是样本—提DNA—打成小片段，然后就开始PCR啊末端修复啊加A啊片段选择啊一系列，***得到片段大小为300-500bp的DNA，ok文库搞定。虽然这行真的干的烦死了，不过离开了真的很想念。 PMS2抗体试剂 苏苏械备20180570号.浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台创新服务

02FGFR通路的异常调控FGF/FGFR通路的异常调控由多种因素介导，包括：基因改变（扩增、突变和染色体易位）；自分泌和旁分泌信号；血管生成以及上皮间质转化（EMT），进而促进细胞增殖、上皮间质转化和血管生成，并推动**的发***展、侵袭、转移等（图2），其中主要的三种调控途径为：a.FGFR基因扩增导致的蛋白过表达；b.***性突变,该突变通常会导致配体亲和力的提高或受体二聚化的增加及活化（配体不存在的情况下），或激酶结构域的组成性***；c.由染色体易位导致的基因融合。图2FGFR异常调控的致*机制[5]图2FGFR异常调控的致*机制[5]03FGFR异常形式以及在不同**中的分布FGFR常见变异形式包括基因扩增/过表达、***突变、基因融合等，此外还有重排、激酶结构域重复及自分泌***等。FGFR的异常表达已在多种实体瘤肿中检测到，如过表达常发生在肺*、脑*、头颈*、前列腺*等，融合常发生在骨髓增生综合征、T细胞淋巴瘤、膀胱*和肝内胆管*等（表1）。福建专注迈杰转化医学NGS平台值得推荐迈杰转化医学获得了欧盟ISO 13485质量认证并通过了国家医疗器械GMP稽查。

    PacBio技术的优缺点PacBio技术的优点：无需PCR扩增，不会人为的引入突变；超长读长，平均读长可达到10Kb，**长读长可以达到40Kb；覆盖均匀，无GC偏好性；通过reads的自我矫正，10X以上准确率能够达到；可以直接检测到甲基化信息，同步进行表观遗传学识别。PacBio技术的缺点：单条序列错误率较高，平均核苷酸准确性不到85%；测序成本较贵。PacBio技术的应用基因组组装利用PacBio测序平台，可以克服部分序列GC含量高或重复序列多等问题，更好的进行基因组详细描绘，从而进行精细的基因注释等研究。PacBio测序平台不需要进行PCR扩增，因此可以减少基因组组装过程中的人为错误和偏差。PacBio测序平台读长较长，因此相比二代测序拼接结果更为准确，同时可以利用其长片段来填补二代数据组装中产生的gap和连接contig为scaffold。全长转录组测序利用PacBio测序平台读长较长的特点，进行转录组测序可以直接得到转录本的全长序列，省去了二代测序的拼接过程，使得过程更为简便，结果更为准确。

    1、Illumina原理：桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像主要步骤：①DNA文库制备——超声打断加接头②Flowcell——吸附流动DN**段③桥式PCR扩增与变性——放大信号④测序——测序碱基转化为光学信号优势劣势：Illumina的这种测序技术每次只添加一个dNTP的特点能够很好的地解决同聚物长度的准确测量问题，它的主要测序错误来源是碱基的替换。而读长短（200bp-500bp）也让其应用有所局限。2、Roche454油包水PCR+4种dNTP车轮大战+检测焦磷酸水解发光主要步骤：①DNA文库制备——喷雾打断加接头②乳液PCR——注水入油**PCR③焦磷酸测序——磁珠入孔，焦磷酸信号转化为光学信号优势劣势：454技术优势测序读长较长，平均可达400bp，缺点是无法准确测量类似于PolyA的情况时，测序反应会一次加入多个T，可能导致结果不准确。也正是由于这一原因，454技术会在测序过程中引入插入和缺失的测序错误。3、IonTorrent原理油包水PCR+4种dNTP车轮大战+微电极PH检测主要步骤：①DNA文库制备——喷雾打断加接头②乳液PCR——注水入油**PCR③微电极pH检测——磁珠入池记录pH优势劣势：IonTorrent与454相比，主要差异在测序中，IonTorrent不需要昂贵的物理成像设备，成本相对较低体积较小。迈杰转化医学利用新一代智能技术补充传统医学的检测模式，赋能医疗健康建设，更好地为临床和患者服务。

    ：针对特定目的核酸片段的测序，首先要对目的测序区域进行PCR扩增；而针对碎片化DNA的测序，则要将碎片化的DN**段通过克隆的方式连接到质粒载体中；对于部分PCR产物的测序也可以对其进行克隆，以保证测序样品的纯度和浓度。：向得到的待测样品中分别加入4种dNTP和4种ddNTP，从而得到不同位置匹配终止的序列。ddNTP循环测序4.凝胶电泳获得序列：对得到的序列进行凝胶电泳，根据碱基的顺序和位置确定序列信息。电泳确定序列***代测序技术的优势和劣势优势：***代测序技术的准确性远高于二、三代测序，因此被称为测序行业的“金标准”；***代测序每个反应可以得到700-1000bp的序列，序列长度高于二代测序；***代测序价格低廉，设备运行时间短，适用于低通量的快速研究项目。劣势：***代测序技术一个反应只能得到一条序列，因此测序通量很低；***代测序技术虽然单个反应价格低廉，但是获得大量序列的成本很高。***代测序技术的应用PCR产物测序：对目的基因的PCR产物进行测序，得到目的基因序列；重测序：突变、SNPs、插入或缺失克隆产物的验证；分型分析：微生物和***分类学鉴定、HLA分型、病毒分型等；临床应用：**突变基因的检测和**个体化***。 迈杰转化医学致力于解决创新药物的研发痛点及患者的用药痛点，助力精zhun医疗！山西一体化迈杰转化医学NGS平台服务至上

迈杰转化医学分子平台可以基于成熟的qPCR技术定量检测外源载体拷贝数，应用于药物分布实验如CAR-T等。浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台创新服务

    同时操作更为简单，整个上机测序可在（文库构建时间除外）。其劣势在于芯片的通量并不高，非常适合小基因组和外显子验证的测序。小结：二代测序相比一代测序大幅降低了成本，保持了较高准确性，并且大幅降低了测序时间，将一个人类基因组从3年降为1周以内，但在序列读长方面比起***代测序技术则要短很多，这也给三代测序提供了发展空间。三、独辟蹊径补空缺三代测序：单分子测序背景：测序技术经过***代、第二代的发展，读长从一代测序的近1000bp，降到了二代测序的几百bp，通量和速度大幅提升，那么第三代测序的发展思路在于保持二代测序的速度和通量优势同时，弥补其读长较短的劣势。三代测序与前两代相比，**大的特点就是单分子测序，测序过程无需进行PCR扩增。1、Oxfordnanopore纳米孔+电流检测技术原理：该技术设计了一种特殊的纳米孔，孔内共价结合有分子接头，**终得到电信号而不是光信号或pH信号的测序技术。当DNA碱基通过纳米孔时，电荷将发生变化，因而短暂地影响流过纳米孔的电流强度（每种碱基所影响的电流变化幅度是不同的），灵敏的电子设备检测到这些变化从而鉴定所通过的碱基。优势劣势：①读长很长，大约在几十kb，甚至100kb；②错误率目前相比较高。浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台创新服务

迈杰转化医学中心实验室建立了覆盖全平台检测业务的中心实验室，具备STARLIMS系统，用于样本/数据管理，能够提供分子检测、病理检测、蛋白检测、生物大分子检测以及流式和细胞检测等全平台的服务。已经获的CNAS ISO 17025的认证、美国病理学家协会CAP认证证书，并多次通过NCCL室间质评/CAP PT认证，可以提供高质量的服务，同时建立了样本接收和生物样本库，可以满足各类温度要求的样本保存，满足中心实验室的要求。

按照CNAS、ISO 15189和临检要求，建立的临床检测实验室。可进行泛实体ai、肺ai、胃ai等ai种的检测，2018年12月取得临床基因扩增检验实验室技术审核验收合格证书。