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    01FGFR简介及信号通路成纤维细胞生长因子受体(FGFR)是高度保守、***分布的跨膜酪氨酸激酶受体，包括FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4四种受体亚型。成纤维细胞生长因子（FGF）与FGFR结合时，受体二聚化，从而引起受体激酶结构域的细胞内磷酸化、细胞内信号传导和基因转录的级联反应[1]。由FGFR***的信号转导通路包括RAS–RAF–MAPK，PI3K–AKT，STAT和PLC途径，它们参与调控多种生物学过程，如***发育、血管新生、细胞增殖、迁移、抗凋亡等（图1）。图1FGFR信号通路[2-4]当FGFR发生突变或者过表达时，会引起四个关键的下游信号通路的过度***，并进一步诱发正常细胞*变：RAS-RAF-MAPK和PI3K-AKT过度***可分别刺激细胞增殖与分化及抑制细胞凋亡；SATA与促进**侵袭和转移，****逃逸能力密切相关；PLCγ信号通路则是**细胞转移调控的重要途径。 迈杰基于基因组学、蛋白组学、细胞组学及病理组学等综合性转化医学平台，丰富的伴随诊断开发经验。湖南专注迈杰转化医学NGS平台创新服务

    h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系的应用，可为(h1)-(h5)中的至少一种：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。上述任一所述68个基因座具体可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10和y-gata-h4组成。其中，amelogenin为性别决定基因座。dyf399s1包含三个分型片段。dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b和dys527a/b均包含两个分型片段。本发明提供的试剂盒可以检测68个基因座。北京定制迈杰转化医学NGS平台技术指导【迈杰转化医学】一直以来致力于转化医学服务和伴随诊断产品开发及商业化。

    ，构建单链DNA测序文库。，固体支撑体的每一个单独小空间中只包含一条DNA链，之后通过PCR特异性的将模板DNA进行富集，从而达到测序所需的模板量。，反应试剂清洗和成像捕捉，不断反复进行此三步循环，每一个循环按顺序测定序列中的一个碱基。第二代测序技术的优缺点第二代测序技术的优点：一次能够同时得到大量的序列数据，相比于一代测序技术，通量提高了成千上万倍；单条序列成本非常低廉。第二代测序技术的缺点：序列读长较短，Illumina平台**长为250-300bp，454平台也只有500bp左右；由于建库中利用了PCR富集序列，因此有一些含量较少的序列可能无法被大量扩增，造成一些信息的丢失，且PCR过程中有一定概率会引入错配碱基；想要得到准确和长度较长的拼接结果，需要测序的覆盖率较高，导致结果错误较多和成本增加。第二代测序技术的应用二代测序是现阶段科研市场的主力平台，主要应用包括：基因组测序、转录组测序、群体测序、扩增子测序、宏基因组测序、重测序等。由于成本较低，二代测序在医学领域应用也十分***，主要包括：**基因组、遗传病基因组、**与代谢疾病等。

    同时操作更为简单，整个上机测序可在（文库构建时间除外）。其劣势在于芯片的通量并不高，非常适合小基因组和外显子验证的测序。小结：二代测序相比一代测序大幅降低了成本，保持了较高准确性，并且大幅降低了测序时间，将一个人类基因组从3年降为1周以内，但在序列读长方面比起***代测序技术则要短很多，这也给三代测序提供了发展空间。三、独辟蹊径补空缺三代测序：单分子测序背景：测序技术经过***代、第二代的发展，读长从一代测序的近1000bp，降到了二代测序的几百bp，通量和速度大幅提升，那么第三代测序的发展思路在于保持二代测序的速度和通量优势同时，弥补其读长较短的劣势。三代测序与前两代相比，**大的特点就是单分子测序，测序过程无需进行PCR扩增。1、Oxfordnanopore纳米孔+电流检测技术原理：该技术设计了一种特殊的纳米孔，孔内共价结合有分子接头，**终得到电信号而不是光信号或pH信号的测序技术。当DNA碱基通过纳米孔时，电荷将发生变化，因而短暂地影响流过纳米孔的电流强度（每种碱基所影响的电流变化幅度是不同的），灵敏的电子设备检测到这些变化从而鉴定所通过的碱基。优势劣势：①读长很长，大约在几十kb，甚至100kb；②错误率目前相比较高。迈杰转化医学获得了欧盟ISO 13485质量认证并通过了国家医疗器械GMP稽查。

    thermofisherscientific)等。研究发现，基于pcr-ce分型时，相同片段长度的等位基因中存在重复区域序列结构不一致的情况。二代测序技术(secondgenerationsequencing，sgs)又称为下一代测序技术(nextgenerationsequencing，ngs)，具有测序通量高、速度快的优点。ngs不仅能从长度多态性上对str基因座进行分析，还能从序列上发掘str基因座的遗传多态性。随着ngs测序成本越来越低、测序读长逐渐的增加，ngs对str分型技术也越来越成熟。近年来，ngs技术已经应用于法医学str分型研究。相比于pcr-ce分型，ngs技术在y-str基因座的分析中具有很多优势：1、样本输入量低，使得微量样本及降解样本检材的分型研究变为可能；2、准确性高，能够全部覆盖基因座的每个碱基并通过产出高测序深度保证y-str基因座各等位基因的高概率精确判断的严谨性；3、能够获得y-str等位基因间的核苷酸差异信息，由于**重复结构存在差异或扩增区段内存在变异(侧翼序列的碱基突变或插入缺失)，序列长度相等的等位基因可能是具有遗传稳定性的完全不同的等位基因，这种y-str序列多态性是个体识别分析的宝贵资源；4、成本低，通过对每个样本检材添加标签一次可以同时对多个样本进行平行测序。迈杰转化医学具有多年伴随诊断服务经验,获得CNAS国际实验室认可,美国CAP认证。安徽组织标本迈杰转化医学NGS平台口碑推荐

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    ***代测序技术常见问题及解决方法样品测序无信号此时测序完全失败，**可能的原因是待测样品出现了降解或引物失效，从而导致测序引物与待测样品无法结合。此时探索造成测序失败的具体原因并无实际意义，**快速、简便的办法是重新提供质量合格的引物和样品再次进行测序。样品测序信号差此种情况可能是引物或模板的质量不高或是引物和模板的匹配性不好引起的，但**有可能的原因是待测样品浓度偏低。待测样品浓度偏低可能是由于PCR效率较低，也可能是PCR与测序间隔时间过长，导致PCR产物降解。建议PCR完成后尽快进行测序，如果PCR产物浓度本身较低，可以使用PCR产物作为模板进行二次PCR，也可以对PCR产物进行克隆后，再进行测序。样品测序衰减可能是由于待测样品包含特殊的核酸结构，如重复序列、回文结构、发卡结构、GC富集区、AT富集区等。由于是样品本身结构问题，因此，无法通过优化测序反应解决，应从待测样品另一端进行反向测序，之后两端的测序结果拼接得到完整序列。样品测序中断此种情况是由于待测样品包含特殊高级结构，导致碱基无法与模板结合，DNA聚合酶无法继续延伸。此情况与样品测序衰减解决办法相同，均为从待测样品另一端进行反向测序。 湖南专注迈杰转化医学NGS平台创新服务