细胞培养中建议使用支原体检测的原因主要有以下几点:
1. 支原体污染率高:常规细胞培养中支原体污染率保守估计在15-35%之间。
2. 影响实验结果:支原体污染会严重干扰实验结果的可信度,影响培养细胞的形态和生理特征。
3. 难以用光学显微镜检测:支原体是极小的细菌,其细胞膜周围没有细胞壁,无法用光学显微镜检测到。
4. 难以消灭:支原体能够迅速渗透整个实验室,一旦污染很难彻底消灭。
5. 影响产品质量:支原体污染会影响细胞培养产物的质量,监管机构推荐检测所有细胞培养产物中是否存在支原体。
6. 保证实验准确性:定期进行支原体检测和去除,确保无支原体存在细胞培养体系内,才能获得准确的实验结果。
支原体污染源和主要类型?杭州细胞支原体去除试剂
支原体检测的应用场景非常广*,以下是一些主要的应用领域:
1. 细胞培养:在实验室和生物制品工厂中,细胞培养过程容易受到支原体污染。支原体污染可能导致细胞功能改变,影响实验结果和生物制品的质量。因此,支原体检测在细胞培养的质量控制中至关重要。科研中常用等温扩增的方法简单便捷。
2. 生物制品生产:在生物制品的生产过程中,如疫苗、生物药物等,需要确保产品无支原体污染,以保证其安全性和有效性。监管机构要求在生产的关键阶段进行支原体检测。通常采用qPCR的方式进行。
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支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响:
01/ 争夺营养:支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失:支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失
07/ 实验结果的不可靠性
08/ 生物安全问题
细胞培养中如果污染了支原体,会有以下几种影响:
1. 细胞生长受影响:支原体污染会导致细胞生长速度减慢,甚至停止生长。细胞可能会变圆,从培养瓶壁脱落。
2. 细胞形态变化:虽然某些细胞在支原体污染后形态变化不明显,但有些细胞会出现体积增大,细胞碎片增多,培养瓶中细胞间隙出现膜状沉积等现象。
3. 代谢和功能改变:支原体污染会影响细胞的代谢和功能,例如培养液中的精氨酸被大量消耗,引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍。支原体活动还可能引起培养液成分和pH值的变化。
4. 实验结果受影响:使用被支原体污染的细胞进行实验会严重影响实验结果,因为支原体会抑制细胞生长,导致染色体畸变,细胞膜抗原性改变,细胞复苏后存活率降低等。
5. 细胞培养环境的污染:一株污染的细胞可能成为实验室的污染源,对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染,进而污染其他细胞,导致其他细胞继发性污染。
6. 科研结果的重复性问题:由于支原体污染,某些实验结果可能能在支原体阳性的细胞中得到,导致科研结果的重复性受到影响
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支原体污染的来源主要包括以下几个方面:
1. 实验室环境中可能存在支原体污染源,如空气中的尘埃、其他培养物中的支原体污染等。
2. 实验操作人员的手部、衣物或皮肤表面可能携带支原体,造成细胞培养的污染。
3. 培养基、血清等培养材料如果受到支原体污染,也会导致细胞培养物受到污染。
4. 细胞交叉污染,即使用已受污染的细胞株进行培养时,可能会污染其他细胞。
5. 实验器材带来的污染,如未彻底消毒灭菌的实验器材。
6. 人体是某些支原体的正常菌群,因此操作人员的疏失也可能成为污染源。
7. 细胞库管理不善,造成实验室间的相互污染。
8. 细胞培养过程中的细菌、酵母或霉菌污染在光学显微镜下可见,但支原体污染在光学显微镜下通常不可见,必须通过特定的检测方法进行检测
支原体去除的实验步骤?苏州细胞支原体污染
支原体及污染方式有哪些?杭州细胞支原体去除试剂
支原体去除的实验步骤通常包括以下几个阶段:
1. 支原体检测:在进行去除之前,首先要确认细胞培养物是否受到支原体污染。这可以通过多种方法实现,如PCR法、LAMP法或支原体培养法。
2. 选择合适的去除试剂:一旦确认存在支原体污染,需要选择一种有效的去除试剂。
3. 去除试剂的添加:根据去除试剂的说明书,将试剂添加到受污染的细胞培养基中。通常,这涉及到将一定比例的去除试剂加入到细胞培养液中。
4. 孵育:添加去除试剂后,将细胞培养物放回培养箱中孵育。孵育时间和条件(如温度、CO2浓度)应根据试剂的推荐进行调整。
5. 监测去除效果:在孵育过程中,定期监测细胞的状态和去除效果。这可能包括观察细胞形态、生长速率的变化,以及通过显微镜检查是否有支原体存在的迹象。
6. 后续检测:去除过程完成后,再次使用支原体检测方法确认污染是否已被成功。
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