重庆IgGZEROIdeS蛋白酶

Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明，所有三个连接子区域均被消解，α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰，α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化，表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比，四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体，剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中，α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离，导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如，在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外，240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。用于抗体疗法（如mAb、ADC和Fc融合蛋白）的表征、质量控制、生产监测。重庆IgGZEROIdeS蛋白酶

Genovis提供冻干和固定化的FabRICATOR（IdeS），为客户提供了许多选择，以满足他们的需求。 冻干形式用于高度灵活的方法开发的目的，并随时准备使用，只需重组和添加到IgG样本。 冻干酶的灵活性也意味着它可以应用于更高的通量和自动化的工作流程。 Genovis还提供了在琼脂糖树脂上固定化的酶，在随时可用的旋转柱中，这可以极大限度地减少在样品中残留的酶，这可能是有利的。 对于更多的制备应用，我们提供FabRICATOR Fab2试剂盒，这是IgG片段生成和纯化的强大工具。 这包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc纯化柱，用于亚基的亲和纯化。 由于FabRICATOR在非还原条件下是活性的，F(ab’)2片段保留其链间和链内二硫键，如果片段想用于结合研究，这一点尤为重要，因为结合效率和免疫反应性将被保留。上海GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶Genovis的FabRICATOR （IdeS蛋白酶）在30分钟内消化IgG，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。

与IdeS不同，Genovis的IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性蛋白酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。该酶能够对复杂和高分子量的人IgM进行中级分析，从而促进疫苗、zhiliao和诊断等过程中的IgM表征。独特-可实现IgM的中级表征和质量控制；快速–在30分钟内生成均匀的F（ab'）2和Fc片段；高度特异性–人IgM重链中的一个消化位点。IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生F（ab'）2和Fc片段。消化在30分钟内完成，并且由于酶的特异性，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。该酶在pH值为5.5至9.0时具有活性，不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。良好的活性是在37°C下，但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgMBRAZOR在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签，分子量为38kDa。

作为免疫系统的重要组成部分，IgA在自身免疫性疾病、过敏反应、胃肠道疾病等许多不同的健康状况中发挥作用。在天然条件和复杂生物样品中选择性和特异性消化IgA的能力在临床医学和研究中具有重要价值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候选物样品复杂性并简化IgA分析表征的宝贵工具。人IgA1和IgA2之间的一个显着结构差异是铰链区域。与IgA2相比，IgA1具有更长的富含O-聚糖且更灵活的铰链区域。IgASAPSub1的消化位点位于该扩展区域，使酶具有IgA1特异性。IgA2亚类以三种等位基因形式存在，A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸（P）和缬氨酸（V）之间消化IgA1和IgA2m1只有N端到铰链区域，但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸残基被精氨酸（R）残基取代，因此这两种同种异体型的IgA2对消化具有抗性。Genovis的GlySERIAS可以对融合蛋白、多特异性抗体。

与IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一种半胱氨酸蛋白酶，可在铰链上方的单个位点（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，产生完整且均质的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单一的消化位点是人IgG1三维结构的结果，使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。GingisKHAN需要温和的还原条件才能具有活性，并且在37°C和pH8下获得活性。还原剂（2mM半胱氨酸）与酶一起提供。GingisKHAN是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。该酶用于使用LC-MS表征基于抗体的生物zhiliao药物，研究Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应，并鉴定翻译后修饰。融合蛋白的中级分析既可以降低整体样品的复杂性，又可以对翻译后修饰进行结构域特异性鉴定和监测。辽宁GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切

Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）。重庆IgGZEROIdeS蛋白酶

与IdeS不同，融合蛋白是通过将两种或多种蛋白质或肽的功能组合成一个量身定制的分子来创造的，以专门应对挑战。连接此类蛋白质或肽结构域的常见方法是包含柔性连接子。这些连接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸残基（G），或甘氨酸残基散布丝氨酸残基（GS）以形成重复序列。这为连接子提供了足够的灵活性，不会干扰连接蛋白质结构域的功能。然而，这些新模式带来了新的分析挑战，需要新的工具来促进表征和产品质量监测。中级分析已成为分析单克隆抗体疗法的标准方法，涉及将分子消化成几个定义的亚基。它们足够小，可以获得高质量的质谱图，并为产品质量属性提供特定领域的信息。由于G和GS连接子对常见蛋白酶的降解具有抗性，因此很难分离结构域以进行深入分析。因此，Genovis开发了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一种消化柔性富含甘氨酸的连接子的酶。GlySERIAS可以分离不同的功能域，并实现对融合蛋白、多特异性抗体和含有富含甘氨酸的连接子的各种mAb片段进行详细表征的中级方法。重庆IgGZEROIdeS蛋白酶