我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白,含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时,可完全去除所有 N-和 O-糖,如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 (EPO) 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质,其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置,因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。GalNAcEXO冻干剂以冻干粉末的形式提供,装在2000单位的小瓶中,用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc残基。福建PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗体、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于减少异质性,以促进蛋白质的分析,例如质谱法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-连接聚糖的快速高效去糖基化;即用型离心柱形式 - 无酶干扰分析;与LC-MS兼容。与PNGase F类似,Genvois的与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常见的粘蛋白型 O-糖所需的酶,即单唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 (α-GalNAc)。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分:PNGase F;O-糖苷酶。湖北固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 (Gal-β1,3-GalNAc);
genovis的FucosEXO在生理缓冲液和中性pH值中具有活性,使其与大多数样品相容。此外,FucosEXO活性不依赖于任何可能影响LC-MS分析的辅因子,如BSA。根据底物的性质,FucosEXO 可在 1 至 2 小时内水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 连接的岩藻糖残基,而对于非常复杂的样品可能需要更长的孵育时间。FucoseEXO也可固定在离心柱中,可快速方便地处理高达0.5mg的糖蛋白。使用离心柱形式,将糖蛋白样品与固定化的FucosEXO树脂一起孵育,然后在离心步骤中轻松收集消化的糖蛋白。
与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR用于携带N-和简单O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 试剂盒包括:OmniGlyZOR 微离心柱;PNGase F 冻干;RapiGest™* SF表面活性剂。除非底物蛋白变性,否则某些 N-糖基化位点很难或无法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在变性条件下使用试剂盒中包含的PNGase F冻干和RapiGest™ SF表面活性剂通过额外的去糖基化步骤去除。使用Genovis的OpeRAT对EPO进行O-糖位点特异性消化:对于jin携带一个或几个 O-糖基化位点的简单底物蛋白,OpeRATOR 也可用于绘制中间水平的 O-糖基化位点。 可以用8M尿素进行洗脱;或使用活性OpeRATOR酶进行洗脱。
Genovis的GlycOCATCH®是一种亲和树脂,可特异性结合O-糖基化(粘蛋白型)蛋白和肽,从而实现简单的工作流程,以富集和纯化携带O-聚糖的蛋白质和肽。洗涤离心柱,并用8M尿素洗脱结合的蛋白质。对洗脱材料的分析表明,由于洗脱O-糖基化蛋白,并且树脂与非糖基化蛋白和N-糖基化蛋白的结合可以忽略不计。选择性结合 O-糖蛋白:为了测试选择性,将一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白与Genovis的GlycOCATCH 一起孵育。为了在肽水平上研究Genvois的GlycOCATCH的O-糖特异性,将O-glcyosyled肽(糖蛋白)与一系列未修饰的肽混合。依那西普和曲妥珠单抗游离聚糖。湖北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
GalactEXO微离心柱经过格式化,可在30-60分钟内水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。福建PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
genovis分析依那西普和曲妥珠单抗游离聚糖:为了确认依那西普和曲妥珠单抗中半乳糖损失的LC-MS数据,进行了释放的N-聚糖分析。标记的N-聚糖的分离清楚地表明了依那西普和曲妥珠单抗上半乳糖的丢失,如半乳糖基化聚糖物种的信号丢失所示。该酶是一种有价值的工具,可降低样品异质性,用于分析携带α连接的 GalNAc 残基作为未成熟截短he心 1 的复杂 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-连接的 GalNAc;2. 实现完全糖基去除,以改善蛋白质表征;3. 可固定在即用型离心柱中。福建PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
GlycOCATCH®亲和纯化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽亲和纯化的富集树脂。GlycOCATCH亲...
【详情】genvois的OpeRATOR 是一种内切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基...
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