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点击序列可以查看区域内的可用酶切位点。我们可以看到所有酶切位点中，在我们实验室有的酶又不会把基因切碎的酶*有Nde1,EcoR1,而Pst1不在载体的酶切位点上，所以排除。这里我们选择双酶切法，所以选择了Nde1,EcoR1两个位点，其中Nde1在前，EcoR1在后-生命科学软件查看可以插入的酶切位点后，返回到目的基因的DNA文件。点击primerforward序列，点击Insertions,***列绿色方框不要管，这个方框是用来添加氨基酸，在构建载体过程不需要调整。把第二列红色方框改成***个酶切位点基因Nde1,然后点击insert.并在前面添加G或者C为保护碱基（也可以网络查询适用的保护碱基）。-生命科学软件。科研人值得收藏的生物医学科研软件介绍 。上海GraphPad Prism生命科学软件多少钱

从Star开始CSD序列前25个左右碱基，此时注意温度比较好在60度左右（22-40碱基数目之间都可以），点击Primers>addprimer>topstrand，点OK。-生命科学软件从END开始CSD序列后25个左右碱基，此时注意温度比较好在60度左右（22-40碱基数目之间都可以），但也要兼顾碱基的长度，如果太长则不好扩增PCR。点击Primers>addprimer>bottomstrand，点OK.这一步先做到这，后续再添加酶和碱基。-生命科学软件点击Emazy>chooseemazy>先移除右边框中的酶，然后再添加你所在实验室中已有的酶，我在这里随便选了6种。如下图所示，然后点确定。上海GraphPad Prism生命科学软件多少钱常用生物学软件的安装与应用。

得到的结果如下图所示。下图中显示的酶是能够切断目的基因的酶，因此要排除。所以我们剩下的可以选择的酶包括Nde1,EcoR1,Pst1共3种酶。下一步打开载体DNA文件。-生命科学软件打开载体以pGADT7AD为例，查看切入位点的酶有哪些。在筛选的过程中还要注意酶切位点不能把基因切断。因此在选择酶切位点时候要保证两点。1.载体中多克隆位点中包含该限制性内切酶。2.目标基因可酶切的位置不包含该限制性内切酶。点击图中标记的地方MCS（多克隆位点）插入基因的位置。-生命科学软件。

标准编辑：进行插入、删除、替换和大小更改。复制并粘贴序列时，会自动传输功能DNA结束：编辑线性DNA序列的末端以添加或去除突出端或磷酸酯序列颜色编码-生命科学软件。将选定的DNA或氨基酸序列设置为十种颜色之一给两条DNA链或蛋白质序列着色。颜色在Map和Sequence视图中都可见特征注释自动注释常用功能，或手动注释新颖功能-生命科学软件。自动特征检测：使用SnapGene***的数据库查找DNA序列中的常见特征，您选择的其他功能可以添加到自定义数据库中手动特征注释：选择DNA或蛋白质序列的一部分，并使用灵活的GenBank兼容空间注释特征生命科学软件有什么特点和功能分析。

模拟-生命科学软件。SnapGene提供优雅、信息丰富的窗口，用于模拟各种常见的克隆换个PCR方法限制性站点指标：确认限制性网站适合克隆独特性：以粗体显示独特的限制性位点或选择自动定义的UniqueCutters或Unique6+Cutters酶组甲基化敏感性：限制性位点被Dam,Dcm或EcoKI甲基化阻断。SnapGene将自动用星号标记该站点特殊性质：利用工具提示来避免有问题的限制网站限制性克隆可视化克隆过程-生命科学软件。如果您已经准备好了一个过程，那么模拟*需几秒钟。如果克隆过程存在设计缺陷，则可以捕获并纠正错误。突破实验瓶颈,SnapGene软件让分子生物学研究更高效。上海GraphPad Prism生命科学软件多少钱

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