湖北唾液外泌体

免疫印迹或蛋白质印迹是分析外泌体较常用的方法之一，其原理是外泌体上特异性抗原与抗体结合。首先对样品进行处理将囊泡裂解并将蛋白质变性，变性后，通过SDS-PAGE分离蛋白质，然后将其转移到硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于针对目的抗原的抗体中。抗体特异性识别膜表面上的抗原，然后将膜暴露于第二抗体中。通过二抗的荧光标签或与二抗偶联的辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶基团进行检测。常用的标记蛋白为CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特异性和重复性会受到所用抗体质量的限制。外泌体的直径比微泡的要小，后者直径为100nm-1μm。外泌体的直径比微泡的要小，后者直径为100nm-1μm。湖北唾液外泌体

质膜的连续内陷较终导致多泡体的形成，多泡体可与细胞内的其他囊泡和细胞器交叉，从而增加了外泌体成分的多样性。根据细胞来源的不同，细胞外囊泡，包括外泌体，可以包含细胞的许多成分，包括DNA、RNA、脂质、代谢物、胞质和细胞表面蛋白。目前产生外泌体的生理目的尚不清楚，需要进一步研究。一个推测的作用是外泌体可能从细胞中去除多余和/或不必要的成分以维持细胞内环境的稳定。近来的研究也表明外泌体中特定细胞成分的功能、靶向、机制驱动的积累，提示它们在调节细胞间通讯中发挥作用。细胞提取试剂盒外泌体作为蛋白质的药物递送载体。

外泌体的相关成分：1、外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层。2、外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链。3、外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流动，参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能。6、外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中。7、与外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物质进行外泌体中是特异性的：如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列（GGAG/CCCU），进行主动包埋。外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层。

外泌体是包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30–150nm)，由所有体外和体内细胞持续分泌。由于人体内复杂的功能，包括细胞间通讯和信号转导，外泌体正在改变研究。这些细胞外囊泡正在生长，这既是为了了解其生物学功能，也是为了将其用于实际应用，如无创诊断和高级调理开发。Dynabeads提供一系列外泌体分离产品和工具，用于表征和分析其RNA和蛋白质含量，以及体外和体内追踪，以帮助您进一步了解这些迷人的外泌体。超速离心方案可能冗长乏味且耗时的。您可使用灵活且可扩展的总外泌体分离试剂从细胞培养基或任何体液中即刻分离完整的外泌体。这些试剂及其随附的方案是多种试验的理想选择，包括处理少量样本和处理多个样本。度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高。

尺寸排阻色谱法（SEC）根据大小来分离样本。该技术应用了一个装有多孔聚合物珠的色谱柱，该聚合物珠包含多个孔和通道，分子根据其直径穿过。半径小的分子穿过柱子的孔迁移需要较长的时间，而大分子则较早地从柱子上洗脱下来。SEC可精确分离大分子和小分子。与离心分离方法相比，SEC分离的外泌体不受剪切力的影响，剪切力可能会改变囊泡的结构。此方法分离到的外泌体纯度较高，在电镜下大小均一，但是获取量少，所需设备特殊。此外，SEC方法与超滤相结合已被用于尿液来源的外泌体的分离和分析。外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层。细胞上清外泌体NTA

外泌体的提取的方式：PS亲和法。湖北唾液外泌体

流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌体定量检测的准确性也在不断上升。将外泌体表面特异性标志物CD63、CD81等相应抗体进行标记，可用流式细胞仪检测到阳性表达，从而实现对外泌体的定量。但流式细胞技术检测时需要单颗粒悬浮液，当外泌体浓度高或分离过程中发生外泌体囊泡聚集时将导致一次观察到多个颗粒，从而导致数据不准确。因此，为了通过流式细胞仪观察，需要将外泌体通过免疫捕获或共价结合固定在磁珠表面上，从而便于将外泌体囊泡暴露于已知或者预期在外泌体表面表达的抗原的荧光偶联抗体中。在流式细胞术之前，可以在落射荧光显微镜（EPI）下观察与磁珠和荧光抗体偶联的外泌体囊泡。当样品通过流式细胞仪时采集荧光信号，不只可以对外泌体进行高通量分析，还可以基于抗原表达对外泌体进行定量或分类。外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶家族的一种。湖北唾液外泌体

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