广州胸水外泌体

外泌体的提取方法：免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。PS法可提取相当高纯度的外泌体。色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不宽泛。神经细胞来源的外泌体含有与神经退行性疾病相关的分子。广州胸水外泌体

外泌体介导中流耐药性:中流细胞来源的外泌体中某些miRNAs和non-codingRNAs(lncRNA)的变化在中流化疗抗药性的发生中起重要作用。Qu等研究发现lncRNA可以通过竞争性结合miR-34/miR-449，促进晚期肾细胞ai细胞中的跨膜受体酪氨酸激酶anexelekto(AXL)和tyrosine[1]proteinkinaseMet(c-MET)表达，引发舒尼替尼耐药。而外泌体能够将这一lncRNA运输至舒尼替尼敏感的ai细胞，从而传播舒尼替尼的抗性。外泌体中的miR21能够抑制卵巢ai细胞凋亡，并通过结合肌动蛋白丝相关蛋白凋亡酶激huo因子(apoptoticproteaseactivatingfactor1，APAF1)使得卵巢ai细胞产生对紫杉醇的抗药性。肥大细胞外泌体外泌体复杂的内容物被认为是疾病诊断的无创或微创生物标志物。

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；参与细胞之间的交流，物质的运输以及正常生理过程的维持，此外还与疾病的产生有关。对分离的外泌体进行体外标记或示踪，有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料和膜渗透型的化合物等。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。

外泌体的生物发生途径主要包括三个关键的检查点：ILV的形成，阻止MVEs的降解以及MVEs和细胞膜的融合，这三个检查点都包含在内体相关的囊泡运输过程中。RABGTPase定位到特定膜结构的表面，通过招募效应因子来调节相应膜结构的囊泡运输，例如，在内体溶酶体运输网络中，RAB5调节早期内体的形成及相互融合；内体膜上RAB5到RAB7的转换调节早期向晚期内体的转变；RAB7调节晚期内体/MVEs与溶酶体的融合来降解ILVs；RAB27调节MVEs与细胞膜的对接和融合来释放ILVs形成外泌体。内吞的膜蛋白，特别是受体酪氨酸激酶家族的表皮生长因子受体，定位到内体和MVEs，通过MVEs和溶酶体融合来进入溶酶体降解，此过程受多种RABGTPases和ESCRT复合体的调控。科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。

外泌体作为药物递送载体较以往的合成系统具有多方面的优势，比如：人工递送载体具有更低的免疫原性，其含有的磷脂双分子层可与靶细胞细胞膜融合，从而避廉价核巨噬细胞系统的吞噬作用。Srivastava等开发了一种基于外泌体-金奈米粒子（Exo-GNP）的药物递送系统—“nanosomes”用于肺病的医治，研究表明该系统与单用多柔比星医治相比，前者的多柔比星释放量增加、摄取率提高、化疗毒性降低且化疗效果增强。此外，还有研究发现，使用外泌体运载紫杉醇（PTX）可显着提高病细胞对PTX的吸收，将PTX加载至外泌体中显着增加了药物细胞毒性，Exo-PTX能显着压制肺病的发展。蛋白质分子在外泌体信号传递过程中起到了非常重要的作用。细菌提取试剂盒价钱

结果表明，PS亲和法可以检测到许多目前为止都无法检测的外泌体蛋白质和RNA。广州胸水外泌体

已经有许多关于外泌体作用的报导，根据这些现象实验中，从体液和培养上清中高纯度提取的高纯度外泌体，在活内是否真的能发生作用尚未能确定。确认外泌体生理作用的单独方法就是明确外泌体的释放机制，通过促进或压制释放机制，分析会引起何种生理作用，这是进一步研究的发展方向。甚至活内的外泌体动态（哪个外泌体迁移至何处）也会成为今后需要努力研究的重要课题。实际上，用PS亲和法提取的人白血病细胞释放的外泌体，其纯度与超离心法和PEG沉淀法提取外泌体做比较，PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上，几乎没有混入外泌体以外的蛋白，回收量高，操作重复性好。广州胸水外泌体

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