血液外泌体蛋白质组学

瘤在生长过程中会不断地将外泌体释放到周围环境中去，同时，外泌体能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更长时间，可以从患者的体液中分离外泌体用于早期临床诊断。随着技术的进步，已经有生物公司尝试涉足外泌体领域，外泌体中存在黑色素瘤标志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相关蛋白，且黑色素瘤患者胞外体中MIA和S100B浓度显着高于健康人群和非黑色素瘤患者，通过检测MIA和S100B表达水平对黑色素瘤的诊治具有积极地参照作用。从本质上说，液态活检是分子诊断在样本来源上的延伸，进一步丰富了检测手段，而随着外泌体的不断揭秘，相信其会在液态活检中发挥越来越重要的作用。超速离心是从生物体液或细胞上清分离外泌体的金标准方法。血液外泌体蛋白质组学

在利用外泌体运输PTX进行抗中流的研究中，由于间充质干细胞可以归巢(homing)至中流细胞微环境并且可以不通过基因操作即可对PTX运输，因此Pessina等采用间充质干细胞SR4987作为分泌外泌体的母代细胞，而后将SR4987与PTX共混，使SR4987分泌的外泌体含有PTX，再利用超速离心法将载有PTX的外泌体分离出来，研究其对体外人胰腺ai细胞株的影响。结果表明外泌体可以有效的运载PTX并不破坏其功能，小泡(主要指外泌体)溶液的蛋白质浓度在0.047～0.095mg/mL之间时可以诱导中流细胞凋亡50%，这种抑制效果与纯PTX对体外ai细胞的抑制效果相当。外周血外泌体提取试剂盒分类外泌体无法分析外泌体具有的生理功能，也是两种提取方法的问题所在。

虽然系统递送的外泌体主要在肝脏、肾脏和脾脏中积累，但通过在外泌体的外表面上展示特定的靶向分子。例如，识别靶抗原的肽或抗体片段，可以获得靶向外泌体；通过在细胞分泌囊泡上展示糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定的纳米抗体，可以使细胞分泌囊泡显示多种蛋白，包括抗体、荧光蛋白和信号分子。自然分泌的外泌体分离纯化直接作为药物的潜力有限，但是，将自然的外泌体分泌所需组分掺入合成脂质体或纳米颗粒中，并且使用可控程序组装后的工程化外泌体模拟物在药学上拥有更大的应用潜力。

研究者利用电穿孔法对外泌体进行DOX的负载，进行体内抗中流效果的研究。实验结果显示，负载DOX的iRGD肽靶向性外泌体对中流的抑制效果远优于单纯的DOX。直接静脉注射DOX，其不仅水溶性低，而且容易使DOX与血液中的蛋白结合，从而被网状内皮系统识别捕获，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌体保护DOX，可以提高DOX水溶性，避免被网状内皮系统捕捉，提高靶向性，从而降低由于用药过量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。从外泌体中筛选的生物标志物，可用于疾病的诊断、预后及治理。

一方面，外泌体可以通过调控细胞的恶性转化如细胞增殖、迁移和侵袭，促进HCC的发生和发展。另一方面，恶性瘤细胞分泌的外泌体可以协同其他瘤细胞一起，调控瘤微环境，以利于HCC发展。人HCC细胞外泌体中含有的一系列miRNAs，会减弱其他HCC细胞中TGF-β通路上的蛋白表达，促进HCC细胞的生长。HCC细胞外泌体还会诱导非致瘤性肝细胞发生细胞迁移和侵袭，具有运动能力的HCC通过释放外泌体诱导肝细胞分泌MMP-2和MMP-9，增强HCC细胞的侵袭能力。经HCC中分离到的CD90+外泌体处理的内皮细胞会表达更多的VEGF和VEGFR1，促进血管生成；同时诱导ICAM-1表达促进细胞转移。还有研究表明外泌体参与HCC缺氧胁迫和药物耐受的调控。近些年关于外泌体研究很普遍。外泌体鉴定nta

临床前研究的证据表明干细胞释放的外泌体可作为心肌修复的潜在无细胞治理剂。血液外泌体蛋白质组学

外泌体的提取方法：超速离心法，这是外泌体提取比较常用的方法。超速离心法得到的外泌的体量比较多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡而不是外泌体。过滤离心法，这种操作简单、省时，不会影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期的准备工作繁杂，比较耗时，量少。血液外泌体蛋白质组学

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