细胞免疫荧光实验注意事项:根据所检测抗原所在位置来确认是否需要加入 Triton 进行通透。若所检测抗原表位位于膜蛋白的白外段,则不需要通透;一般 5% BSA 封闭即可达到效果;从加荧光二抗起,后面所有操作步骤尽量避光。缩短在荧光显微镜下的观察时间,1~2 h 为宜。染色后尽快荧光显微镜下观察,若不能可放入 4 ℃ 冰箱避光保存一周。无/弱染色:烤片温度过高,推荐 56~60 ℃ 1~2 h;一抗是否适用固定液和石蜡切片,使用浓度是否过低,孵育是否时间过短等。免疫荧光技术可以通过荧光显微镜观察样品中的荧光信号,从而确定目标分子的存在和位置。公司免疫荧光IF
免疫荧光在神经退行性疾病研究中具有广泛的应用,为解开这些疾病的谜团提供了重要手段。在阿尔茨海默病的研究中,免疫荧光可用于标记β-淀粉样蛋白(Aβ)和tau蛋白。Aβ的沉积和tau蛋白的过度磷酸化是阿尔茨海默病的主要病理特征。通过免疫荧光,可以观察到Aβ斑块和tau蛋白缠结在大脑组织中的分布情况。这有助于研究人员深入了解阿尔茨海默病的发病机制,探索疾病的早期诊断方法,以及评估潜在***药物对这些病理特征的影响。在帕金森病的研究中,免疫荧光可以标记α-突触**白。α-突触**白的聚集形成路易小体是帕金森病的重要病理标志。通过免疫荧光观察α-突触**白在神经元中的聚集情况,能够研究帕金森病的神经元损伤机制,以及寻找可能的干预靶点。OPG免疫组化IHC免疫荧光技术可以通过荧光信号显示和检查细胞或组织内的抗原或半抗原物质。
细胞的固定及免疫荧光:吸去一抗,使用PBS浸洗 3 次,每次 5 min。向孔内滴加足够量适宜浓度的二抗,37℃,室温避光孵育1小时。注意二抗带有荧光素标记,因此操作过程尽量在暗处进行。吸去二抗,使用PBS浸洗 3 次,每次 5 min。向玻片上滴加DAPI,或者Hoechst复染细胞核,一般为蓝色荧光;避光孵育5-10min。使用PBS轻洗细胞3 次,每次 5 min,洗去多余的DAPI。取爬片时由于爬片与培养皿底结合较紧,张力较大,可将注射器针头针尖向背面做个小钩,这样将爬片轻轻勾起,用小镊子取出即可。用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,注意将爬片反过来贴于多聚赖氨酸载玻片上,然后在荧光显微镜下观察并采集图像,注意选择抗体对应的激发光源。
在胚胎神经系统发育过程中,神经元的分化、迁移和神经回路的形成是复杂而有序的过程。利用多色免疫荧光,我们可以用不同颜色标记神经元的不同发育阶段标志物。例如,用绿色荧光标记神经干细胞的标志物,红色荧光标记正在分化的神经元的标志物,蓝色荧光标记已经成熟的神经元的标志物。这样就能在胚胎脑组织切片上观察到神经干细胞是如何逐渐分化为成熟神经元,以及这些神经元如何迁移到特定位置形成神经回路的。同时,我们还可以用不同颜色标记神经发育过程中的信号分子和细胞外基质成分。比如,用黄色荧光标记神经营养因子,紫色荧光标记神经细胞迁移过程中依赖的细胞外基质蛋白。通过观察这些标记成分与神经元的相互关系,可以深入研究神经系统发育的调控机制,包括信号分子对神经元分化和迁移的诱导作用,以及细胞外基质对神经细胞定位的支持作用。免疫荧光技术可以用于研究细胞分裂和细胞周期。
免疫荧光的原理和类型:免疫荧光利用荧光分子或荧光团在一定波长(分子的吸收光谱)下吸收光子的特性,经过短暂的间隔(发射光谱)后以较高的波长发射光子,并伴随能量损失。发射的荧光可通过显微镜观察到。荧光团可以通过可见光或紫外光激发。具有高光稳定性和荧光量子产率的荧光染料可在市场上购买,其激发较大值跨越从400到>700nm的波长范围。它们不会损伤活细胞,可安全用于生物制剂。在进行免疫荧光检测时,首先对细胞或组织进行固定和透化处理。进行免疫染色时,荧光团与目标抗原的抗体结合,然后使用成像显微镜观察荧光信号。根据使用的抗体和所需的信号扩增,免疫荧光可分为直接和间接两种类型。免疫荧光在医学诊断中起着重要作用,可以用于检测病原体、肉瘤标志物等。P21免疫荧光分析
免疫荧光技术在免疫学研究中发挥重要作用,帮助揭示细胞和分子的功能和相互关系。公司免疫荧光IF
免疫组化对于内分泌系统疾病的诊断有着重要的助力作用。内分泌系统通过分泌***来调节身体的各种生理功能,内分泌***如甲状腺、肾上腺、胰腺等发生病变会导致多种疾病。在甲状腺疾病的诊断中,免疫组化是一种重要的辅助手段。例如,在桥本甲状腺炎的诊断中,免疫组化可以检测甲状腺组织中的自身抗体,如甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)和甲状腺球蛋白抗体(TgAb)。这些抗体在桥本甲状腺炎患者的甲状腺组织中常常呈现高表达,通过免疫组化可以直观地观察到抗体与甲状腺细胞的结合情况,辅助诊断桥本甲状腺炎,并判断疾病的严重程度。在肾上腺疾病方面,如肾上腺皮质*的诊断,免疫组化可以检测肾上腺皮质*细胞中的标志物,如inhibin-A、Melan-A等。这些标志物有助于区分肾上腺皮质*与其他肾上腺**,为制定合理的治疗方案提供依据。公司免疫荧光IF
在肺炎的研究中,肺部***涉及多种病原体和复杂的免疫反应。多重免疫组化可以同时标记病原体相关抗原,如肺炎链球菌的荚膜多糖抗原,同时标记肺部的免疫细胞标志物,如肺泡巨噬细胞的 CD68、中性粒细胞的髓过氧化物酶(MPO)以及淋巴细胞的 CD3、CD4、CD8 等,还可以标记炎症细胞因子,如白细胞介素 - 1β(IL - 1β)、肿瘤坏死因子 - α(TNF - α)。通过观察这些标志物在肺部组织中的分布和相互关系,可以了解肺炎病原体的***部位、免疫细胞的防御反应以及炎症因子在肺炎发病机制中的作用。例如,在细菌性肺炎中,如果发现肺泡巨噬细胞周围有大量的肺炎链球菌抗原,同时 IL - 1β 和 T...