CX43免疫

免疫荧光的制作：样品准备（贴壁细胞、悬浮细胞以及组织等）：对于贴壁细胞：先将洁净的盖玻片在70%乙醇中进行浸泡处理，然后用干净无菌的镊子放置到培养皿中，用无菌PBS洗去残留的乙醇。待细胞接近长成单层后取出盖玻片，操作小心，防止细胞脱片。对于悬浮细胞：有2种方法，①先在悬浮液中进行固定步骤，然后把细胞滴加在载玻片上，干燥后细胞会紧贴在载玻片上。②先在悬浮液中进行固定和染色步骤，离心洗脱，然后用移液管移至盒式玻片进行后续染色步骤。对于冷冻切片：切片放置在载玻片上后，可以直接进行固定等后续操作。对于石蜡切片：免疫荧光中石蜡切片较少，要先进行脱蜡和抗原修复处理。免疫荧光技术可以用于研究病毒传播和免疫应答。CX43免疫

免疫荧光间接法测抗体实验步骤：滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于已知抗原标本片，10min后弃去，使标本片保持一定湿度。滴加以0.01mol/L，pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本，覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内，37℃保温30min。取出玻片，置于玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗1-2次，然后按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸5min，不时振荡。取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，滴加一滴一定稀释度的荧光标记的抗人球蛋白抗体。将玻片平放在有盖搪瓷盒内，37℃保温30min。重复操作3。取出玻片，用滤纸吸去多余水分，滴加一滴缓冲甘油，再覆以盖玻片。荧光显微镜高倍视野下观察，结果判定同直接法。SIRT7免疫荧光试验免疫荧光技术可以同时检测多个目标分子，通过不同颜色的荧光染料进行标记。

免疫荧光应用范围：其应用范围极其普遍，可以测定内分泌、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肉瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。根据诊断类别，又可分为传染性疾病、内分泌、药物检测、免疫学、血型鉴定等。许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。异硫氰酸荧光素为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4，较大吸收光波长为490495nm，较大发射光波长520530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。

免疫荧光实验步骤：1.样本准备：细胞或薄组织。对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。2.固定：取适当的固定剂固定样本。一般用4%PFA固定4℃过夜。固定完毕后的样本可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。3.洗涤：PBS洗涤5min*3次。4.打孔：选择合适的通透剂处理样本，目的是使抗体更容易进入细胞与抗原结合。免疫荧光技术利用荧光染料标记的抗体与目标分子结合，从而实现可视化检测。

检测复杂的生物学结构需要较高清晰度的荧光信号，并将荧光信号从背景噪声中分离开来。标准的免疫荧光标记很少能够获得较佳信噪比的成像效果。获得良好图片和较佳的可供发表的高质量图像之间的差异就在于：需要精细调整样品信号达到峰值特异性、高清晰度和较佳放大倍数。虽然荧光基团是进行高质量细胞成像的较佳选择，但不可避免地也极易发生光漂白，即荧光信号的光化学降解或衰退。任何光敏感度的下降都可能导致数据出现偏差，产生假性结果。抗淬灭封片剂可以保护荧光标记蛋白的稳定性，维持数周乃至数月的图像信号完整度。使用已知荧光抗原标记物质来检查相应抗体的方法被称为荧光抗原技术。SIRT7免疫荧光试验

免疫荧光技术可以用于研究肉瘤的发生和发展过程。CX43免疫

荧光抗体技术：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。免疫荧光测定：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。免疫荧光实验步骤：直接法测抗原：基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。CX43免疫