血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成分虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、元素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。牛血清是细胞培养中用量更大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成分,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。1.提供对维持细胞指数生长的元素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他元素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到消毒作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。胎牛血清可以使细胞传代时,将剩余的胰蛋白酶失去活性,因此能够起到保护细胞不受到伤害的作用。兰溪胎牛血清
我们都知道干细胞是十分脆弱的,培养干细胞大多使用胎牛血清来完成实验。胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然,胎牛血清是品质更高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分更少。优良的胎牛血清不仅为细胞提供细胞生产提供不可替代的营养成分,也会让细胞培养实验更轻松。提供细胞生长所需的天然元素或天然的生长因子。提供天然的结合蛋白,能识别氨基酸、脂质、金属离子和元素等,能结合并调节它们的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并对细胞代谢、生物合成、增殖和存活具有潜在的影响。又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多个钙离子结合位点,因而能调节和维持血清中的钙离子浓度。兰溪胎牛血清胎牛血清提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
为什么血清具有批次间可变性?血清是从生物来源提取的,其成分会存在批次之间的差异。为了尽可能减少应用变化,我们对每个批次均执行严格的质量检测,使用高质量标准,尽可能确保批间一致性。胎牛血清的颜色和我之前使用的批次不同,会影响血清使用效果吗?血清的颜色取决于血红蛋白浓度,而该参数的差异不会影响血清的性能。为什么血清的来源很重要?血清的来源(或原产地)是指收集未加工血液的国家。不要与血清分离、过滤或其他加工处理所在国家混淆,二者可能是不同的。血清供应商的CoA文件应该明确写明血清原产地和加工信息。
胎牛血清是一种天然产物,原产地牛源的生长环境和健康状况对于血清的产量和品质都有着重要影响。当产地的气候、环境等因素发生变化时,牛只数量的减少会直接影响血清产量,例如近年来澳洲爆发的森林火灾、千年难遇洪水、蓝舌病病情等,对当地畜牧产业造成了深远影响。随全球科研领域不断发展,血清需求量日益增加,合规血源变得愈发珍稀,高等血清更是一货难求。受此国际市场环境的巨大冲击,近期澳大利亚、新西兰和南美乌拉圭进口胎牛血清的原料价格持续高涨。胎牛血清勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
胎牛血清(FoetalBovineSerum,简称FBS):是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段,血中含有丰富的生长发育因子,非常适合各种细胞的培养,一旦胚胎发育完全这些因子自动消失。因此8个月胎龄以上的牛胚胎,已接近足月,不能作为胎牛血清的原料来使用。有下列情况者,对血清内有害元素应格外留意筛选:1.养干细胞时,干细胞对内有害元素非常敏感,如果血清中内有害元素≥3EU/ml时,干细胞很容易死亡。很多使用者,在血清在试用前,就通过提早审核该批次《检测报告》,以决定是否入围进行试用。2.养免疫细胞时,过高的内有害元素可诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等。3.基因敲除相关的细胞实验,培养的细胞要尽可能保持其原始状态,任何引导细胞衰老或凋亡的试剂,都会让后续的实验结果“失之毫厘,谬以千里”。在准备血清和其他试剂时,选择极低的内有害元素(更好≤1EU/ml),对实验至关重要。对于细胞培养而言,胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)的重要性不言而喻。兴化RPMI 1640 Medium (含双抗)
胎牛血清对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。兰溪胎牛血清
胎牛血清的保存方法:热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物明显增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。血清中的沉淀物絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会明显增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。兰溪胎牛血清
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