科研实验中试剂取用应注意事项:1. 固体试剂的取用:取用固体药品时药匙必须是干净的.一支药匙不能同时取用两种或两种以上的试剂.药匙每取完一种试剂后都必须用干净的纸擦拭干净,以备下次使用.药匙的两端为大小两匙,取固体量较多时用大匙,较少时用小匙。2. 取用不定量(较多)液体——直接倾倒a. 瓶塞必须倒放在桌面上【防止药品腐蚀实验台或污染药品】;b. 直接倾倒时瓶口必须紧挨试管口,试管45度,并且缓缓地倒【防止药液损失】;c. 贴标签的一面必须朝向手心处【防止药液洒出腐蚀标签】;d. 倒完液体后,要立即盖紧瓶塞,并把瓶子放回原处,标签朝向外面【防止药品潮解、变质】。液体试剂可以减少某些药物的刺激性。Nitsch培养基
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液(如HOAc与NaOAc),弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·H2O与NH4Cl)等都是缓冲溶液。由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用,是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。当向这种溶液中加入一定量的强酸时,H+离子基本上被A-离子消耗:所以溶液的pH值几乎不变;当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。pH标准缓冲溶液(pH=7.00)检测试剂盒汲取液体时速度不易太快,以免发生气泡。
检测试剂盒样品收集、处理及保存方法:血清:使用不含热原和内毒液的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
弱酸-弱碱型缓冲溶液的构成与配制。这类缓冲溶液的组成为:弱酸+弱酸盐(即共轭碱)、弱碱+弱碱盐(即共轭酸)。常见的实例有:HAc-NaAc、HAc-NH4Ac(微酸性)、NH4Cl-NH3.这类缓冲溶液的实验室配制方法一般是根据溶液组成和浓度要求,直接称取或量取弱酸、弱酸盐溶液或弱碱、弱碱盐溶液来配制。其实,这类缓冲溶液还可以用强酸与弱碱、强碱与酸来配制,归纳起来,应该有三种配制方法:(1)弱酸+弱酸盐,弱碱+弱碱盐例如,HAc-NaAc、NH4Cl-NH3(2)弱酸(过量)+强碱(适量),弱碱(过量)+强酸(适量)例如,HAc(过量)-NaOH(适量)、NH3(过量)-HCl(适量)。这类缓冲溶液需要的共轭碱(NaAc)或共轭酸(NH4Cl)是通过反应后产生的。(3)弱酸盐(过量)+强酸(不足量)或弱碱盐(过量)+强碱(不足量)例如,NaAc(过量)+HCl(适量),NH4Cl(过量)+NaOH(适量)缓冲溶液需要的弱酸(HAc)或弱碱(NH3)则通过反应后产生。BMC原代分离步骤:较上面是血浆,血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。
检测试剂盒样品收集:血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒液试管。血浆:抗凝剂推荐使用EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,血脂高样品。组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。检测试剂盒在检测试剂盒中一般有3次加样步聚。软骨染色液(甲苯胺蓝法)
科研实验中试剂取用应注意事项:取液后的滴管,应保持橡胶胶帽在上,不要平放或倒置。Nitsch培养基
我们在检测试剂盒实验中,有时会遇到样品浓度挨近检测试剂盒的灵敏度就容易发生样本OD450值低于空白值的现象,特别是在血清和血浆样本中。这就有可能是基质效应导致的结果。首先我们要知道什么是基质,基质是指样品中目标分析物以外的部分。由于基质成分会对分析过程有明显干扰,影响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应。这是检测试剂盒开发和使用中需要避开的雷。如何判断是否是基质效应呢?当单个样本或少量样本值低于空白值时,可能是实验操作出现问题,这时应增加重复,进步操作技术。当许多样本都低于空白值时,应思考基质效应的影响,建立校正曲线予以修改。基质效应的原因错综复杂,有可能是样品中存在的基质导致原抗体的联络结合能力下降,便产生了样本值低于空白值的现象。导致样本值无法计算出数值,或许数值为负。Nitsch培养基