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GB 29989 婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定

标准曲线的绘制吸取左旋肉碱标准工作液2.0mL于1cm比色皿中，加入0.8mL显色工作液和100µL乙酰辅酶A溶液，盖上比色皿盖，混合均匀后放入分光光度计中，分光光度计的波长调为412nm，5min后归零。迅速加入100µL乙酰肉碱转移酶溶液，混合均匀后放入分光光度计中，反应10min后记录吸光值。以左旋肉碱标准工作液的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，制作标准曲线。

试样测定取2.0mL试样处理液按上述的步骤测定其吸光值。在标准曲线上查得试样待测液的浓度。

分析结果的表述试样中的左旋肉碱的含量X，以质量分数mg/100g表示7精密度在重复性条件下获得的两次**测定结果的***差值不应超过算术平均值的10%。

其他方法检出限0.6mg/100g，定量限为2mg/100g。 上海普誉科贸有限公司为您提供 左旋肉碱测定用服务，欢迎您的来电哦！辽宁左旋肉碱测定用左旋肉碱测定用试剂肉碱乙酰转移酶

试剂的组成和配制试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。试剂二：粉剂×1支，-20℃保存。临用前加入250μL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。试剂三：液体10μL×1支，4℃保存。临用前加入250μL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加入22.5mL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。试剂五：液体30mL×1瓶，4℃保存。工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.92mL），将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定24样）；加样前置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴锅中预热30min；现配现用；咸阳肉碱测定用左旋肉碱测定用试剂肉碱乙酰转移酶上海普誉科贸有限公司为您提供 左旋肉碱测定用服务，价格实惠，欢迎您的来电哦！

乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）含量测定试剂盒说明书分光光度法25管/24样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义乙酰辅酶A***存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP合成。此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。测定原理苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。

1试验方法——《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定》（GB29989—2013）1.1原理概述将样品中的蛋白质用高氯酸溶液沉淀，过滤后的滤液用氢氧化钾溶液皂化，使左旋肉碱游离。在乙酰肉碱转移酶的催化作用下，游离的左旋肉碱和乙酰辅酶A反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A。辅酶A和显色剂发生显色反应，可从工作曲线上查得相应的质量浓度，据此计算样品中左旋肉碱的含量。1.2试验用品1.2.1试剂和标准品13%的高氯酸溶液（HClO4）;4mol/L的氢氧化钾溶液（KOH）;10mol/L的氢氧化钠溶液（NaOH）;2-硝基苯甲酸;N-2-羟乙基哌嗪-2-乙烷磺酸;乙二胺四乙酸二钠;乙酰辅酶A（CoA）;乙酰肉碱转移酶（CAT）。其中，乙酰辅酶A（CoA）和乙酰肉碱转移酶（CAT）需要在2～8℃的环境中保存。试验用水均为三级水，所用试剂均为分析纯。左旋肉碱标准品（C7H15NO3）：纯度≥98%。上海普誉科贸有限公司是一家专业提供 左旋肉碱测定用的公司，欢迎您的来电！

乙酰辅酶A含量计算标准条件下测定的回归方程为y=1640x+0.012；x为吸光值，y为标准品浓度（nmol/mL）。注意：本试剂盒比较低检测限为1.6nmol/mL。（1）按照蛋白浓度计算乙酰辅酶A含量(nmol/mgprot)=[(1640×ΔA＋0.012)×V1]÷(V1×Cpr)=(1640×ΔA＋0.012)÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。（2）按照样本质量计算乙酰辅酶A含量(nmol/g鲜重)=[(1640×ΔA＋0.012)×V1]÷(W×V1÷V2)=(1640×ΔA＋0.012)÷W(3)按照细菌或细胞密度计算：乙酰辅酶A含量(nmol/104)=[(1640×ΔA＋0.012)×V1]÷(500×V1÷V2)=(1640×ΔA＋0.012)÷500V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。上海普誉科贸有限公司是一家专业提供 左旋肉碱测定用的公司，价格实惠，有想法的可以来电咨询！陕西左旋肉碱测定用左旋肉碱测定用试剂乙酰辅酶A

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GB 29989 婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定

荧光光度法

MitsuoMaehara等14(1988)采用一种简单的荧光法对血清中游离肉碱进行测定,测定原理与分光光度法基本类似。肉碱与乙酷CoA在CAT的催化下反应生成乙酷肉碱和COASH，COASH与BIPM耦合生产强荧光物质COA-BIPM光强度与肉碱的含量成正比。通过测定荧光强度,可以得知血清中的肉碱含量。该方法的批内和批间变异系数(C分别为5.2%和2.6%,肉碱回收率在98%~113%之间与显色法的测定结果相比具有良好的相关性(相关系数r>0.90)。该方法灵敏度较高,比较低检测限为10pmol/L。KojiroMatsumoto等[15](1990)开发了光流动注射法对丙戊酸***的患者血清中的肉碱进行测定。该方法使用了肉碱脱氢酶(CDH)和硫辛酷胺脱氢酶(DS)两种固定化酶催化两步反应***是肉碱和氧化型辅酶I(NAD+)在CDH的催化下反应生成还原型辅酶I(NADH)第二步是NADH和刃天青(C12H7NO4)在DS的催化下反应生成物质试灵(C12H7NO3)试卤灵的荧光强度与肉碱的含量成正比。用该方法检测肉碱时,肉碱的标准曲线在0.1~1.0nmol范围内线性测的激发光波长和发光波长分别为560nm和580nm。 辽宁左旋肉碱测定用左旋肉碱测定用试剂肉碱乙酰转移酶

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