加压筛选：1.细胞染上病毒48h后，荧光显微镜下观察荧光细胞比例；2.对24孔板细胞进行传代，根据细胞生长速度由一个孔分成3-5个孔，过夜培养。同时也接种正常的未染上病毒的目的细胞；3.根据包装的慢病毒载体上的筛选，进行加压筛选，这里以嘌呤霉素为例；4.不同细胞对嘌呤霉素的敏感程度也不一样，所以需要设浓度梯度。本实验室的经验是从1µg/ml到10µg/ml去设立3-5个浓度梯度；5.再培养24-48h后观察细胞的死亡情况，选择比较好的嘌呤霉素浓度孔细胞进行后续实验；6.后期根据细胞的生长速度和生长情况，可以适当增大或减少嘌呤霉素的浓度；7.待细胞长满后进行扩大培养，用于检测目的基因的过表达或者干扰情况；8.检测正确后进行细胞的培养冻存或者继续进行单克隆细胞株的筛选。如何正确选择合适的细胞株？宁夏NCI-H226细胞株购买
注意：细胞接种的密度，太稀有可能细胞会死亡，太密不利于后面的荧光观察。96孔板大部分细胞可以接种1-5×103/孔，具体接种量要根据不同细胞的生长速度来确定；Polybrene的浓度也需要根据不同的细胞去调整，有些细胞比较敏感，可以不加；对于MOI的分组设置也需要根据不同细胞去调整，大部分病细胞可以根据上面的比例去设置，但有些难染上的细胞可能需要增加到100个MOI。上海中乔新舟生物科技有限公司产品线比较丰富：现有美国Sciencell(原代细胞及配套全能培养基、细胞培养试剂、检测试剂盒、生长因子等)、新一代无血清培养基、年产1000万毫升内蒙古合作牛血清生产基地等。河北A549细胞株品牌细胞株有什么特点？上海中乔新舟告诉您。
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那如何确定病毒染上目的细胞的MOI呢？多数细胞查阅文献也能获得推荐的MOI，但不同实验室，不同病毒测算出的MOI也有差别。所以建议根据自己包装的慢病毒重新检测MOI。简要步骤如下：1.目的细胞正常传代，接种96孔板，按细胞的生长速度来确定接种量，一般情况以72h长满单层为标准；2.根据测定的慢病毒滴度，进行病毒的稀释；3.MOI设定1、5、10、20；4.96孔板中的细胞过夜培养后，换液加病毒，同时加入终浓度为8µg/ml polybrene；5.3天后观察荧光比例；6.以80%细胞发荧光来评价比较好MOI。上海关于细胞株的介绍。湖南95-D细胞株种类
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