宁波国产数字PCR如何选型

       数字PCR是一种核酸分子***值定量技术，能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的***值定量。该试剂盒采用创新的一步法逆转录数字PCR技术，将*****的RNA逆转录及数字PCR扩增整合到一个反应体系，单管双检同时测定*****的两个**基因，消除***变异带来的漏检风险。

       MicroDrop-100全新微滴式数字PCR系统为永诺生物旗下子公司永诺医疗自主研发的检测设备，此系统检测无需依赖标准物质，可达到***定量，具有超高灵敏度，检测灵敏度高达1个拷贝，且具有较好的重复性，降低同样本不同批次的检测差异。数字PCR结果采取终点判读法，相比荧光定量PCR的过程性读取可有效降低对PCR 扩增效率的依赖、降低PCR***物对检测结果的影响，对于复杂样本也能提供稳定的检测结果等特点，在******临床实验及***患者的治疗过程中可发挥重要作用。 20微升体系生成100,000微滴。宁波国产数字PCR如何选型

       数字PCR也叫Digital PCR（dPCR），是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说，数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值，不受扩增效率的影响，能够直接读出DNA的分子个数，能够对起始样本核酸分子***定量。

       数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份，然后再将其分配到不同的反应单元中，使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子（即DNA模板），每个单元都会对目标分子进行扩增，然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。相对而言，传统PCR或qPCR反应都是发生于同一体系当中，这也是数字PCR与其比较大的区别。 无锡流式数字PCR现货率先行业的10万个微滴数，保证泊松分布所需要的充分的样本量。

       数字PCR（Digital PCR-dPCR）技术是一种新的核酸检测和定量方法，与传统定量PCR（qPCR）技术不同，数字PCR采用***定量的方式，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数。由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性，dPCR迅速得到***的应用，这项技术在极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面变现出的优势已被普遍认可，而其在基因表达研究、microRNA研究、基因组拷贝数鉴定、**标志物稀有突变检测、致病微生物鉴定、转基因成分鉴定、NGS测序文库精确定量和结果验证等诸多方面具有的广阔应用前景已经受到越来越多的关注。

**个体化诊疗

通过检测T790M位点突变情况，可以更好地评估一代TKI***的疗效及耐药情况并指导第三代TKI靶向药Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平台ARMS检测技术的灵敏度有限，没有办法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效准确的检测到T790M突变。这个时候dPCR技术展现出了****的检测精度，此外，dPCR***定量的优势也能充分发挥出来了，可以监控突变含量变化，做到及早发现耐药。

2.）基因表达分析

伊马替尼（Imatinib）可以有效帮助很多慢性髓细胞白血病（CML）患者延长生存期，但是临床上发现，伊马替尼的疗效与BCR-ABL1融合基因的转录产物表达量有很大的关系。研究人员采用dPCR对CML患者的BCR-ABL1融合基因转录产物进行测定，结果检测下限可以达到0.001%，显示出dPCR在痕量核酸检测方面比qPCR具有无可比拟的优势 永诺生物MicroDrop-100微滴式数字PCR仪超越行业的10万个微滴数，保证泊松分布所需要的充分的样本量。

       要了解为什么传统 PCR 存在限制，务必要了解 PCR 反应过程中发生了什么。基本 PCR 运行可以分为三个阶段：

指数期

       每个循环积聚的产物准确加倍（假定 ** 反应效率）。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。

线性期（高变异性）

       随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的 PCR 产物不再加倍。

平台期（终点：使用传统方法进行凝胶检测）

       反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR 产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统 PCR 进行测量，又称为终点检测。 CRISPR-Cas9基因编辑结果验证。深圳JUE对定量数字PCR解决方案

油包水乳化微滴技术，在微管道中利用气压驱动生成十万个微滴，单个微滴体积体积低至皮升级。宁波国产数字PCR如何选型

研究方向

       低丰度及稀有序列的精确定量

       目前对于低丰度目标序列的检测，定量PCR、杂交、毛细管测序及NGS等方法都因受到背景DNA的干扰，使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下，其重复性就不是很高)， 而微滴式数字PCR系统通过**的微滴  化处理，使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来，从而提高了检测的灵敏度及重复性。

       此外，由于样品微滴化处理的同时，也将样品中可能存在的***剂进行了分装，提高了数字PCR扩增对于***剂的耐受程度，因此可具体应用于很多临床样品(血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液等)中对**核酸标记物的检测。一般而言，毛细管电泳和定量PCR的检测灵敏度约在10%;NGS的灵敏度可达到1%;而ddPCR的检测下限为0.001%。 宁波国产数字PCR如何选型

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