在宠物医院,往往没有专业的实验环境与PCR分区,样本中病原体污染、PCR反应后产物污染都是会很影响PCR结果,导致假阳性的出现,其中PCR产物污染是导致化验室环境污染**主要的因素(PCR反应中DNA的复制是指数级的增长)。而选择不善于处理低浓度样本与复杂样本的提取方法,导致核酸提取不完全或者在**1后PCR反应中存在抑制物,污染PCR反应,则会导致漏检,产生假阴性。这些都是在核酸检测过程中需要注意的点。巧亦捷PCR反应系统采用磁珠法核酸提取纯化加荧光探针PCR方法,整机一体化,实现一机提取加扩增,减少人工操作与培训时间,轻松上手。避免污染。在宠物医疗中,目前病毒检测主要包括胶体金检测(试纸)和PCR检测。薄膜微流控PCR仪器生产公司
PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(热稳定DNA聚合酶)的作用下,由一对特异性引物经热变性-退火-延伸反应,三个不同温度的循环处理使得DNA由少量扩增到多量的一种体外DNA扩增技术。在反应体系内,以一对人工合成的寡核苷酸作为扩增引物,第一步,模板DNA变性,以构成脱氧核糖核酸的四种脱氧核苷酸为底物,目的基因作为模板,在DNA聚合酶的作用下模板DNA经过80-90℃高温变性,使模板DNA双链经PCR扩增形成的双链解离成单链。第二步,模板DNA与引物退火(复性),模板DNA解离成单链后温度降至50-60℃,引物与模板DNA单链互补配对。第三步,引物的延伸,DNA模板-引物结合物在DNA聚合酶作用下,70-75℃以dNTP为反应原料半保留复制合成一条新的模板DNA链。这三个步骤为一个循环,2-4分钟即可完成一个循环,2-3小时就能使极微量的DNA、片段、甚至单拷贝基因复制到几百万倍,从而实现对靶DNA的放大。由于扩增碱基序列按照靶DNA复制,因此PCR反应具有高度特异性。薄膜微流控PCR仪器生产公司传染病是由某些具有致病性的微生物,如细菌、病毒等引起的,能够在某种动物或多种动物之间传播的一些疾病。
经过多年的科研,PCR技术应用于动物疫病的检测和诊断中,具有特异性高和便于操作等特点,得到了宽泛的临床应用。该技术能够在比较短的时间内使基因进行快速的扩增,从而使微量的基因检测在临床中得到应用实践。在PCR技术实际应用的过程中,其优点主要包括以下几方面。首先,操作性较强,技术能够简单的应用于实际的工作中。其次,高效的扩增结果,能够实现成果的转化。***,特异性较高,技术性较强。现阶段,该技术能够在很短的时间内实现快速扩张的形势使微量基因得到快速的检测。
巧亦捷核酸一体机采用的探针法荧光PCR与常规PCR的不同之处在于:在上、下游引物外还加入了具有序列特异性的探针(探针本身具有荧光标记),该探针根据需要扩增的靶序列设计因此只能与待检测序列结合,与染料法相比提高了实验的特异性。目前市场上的探针主要种类有:TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等,其中以TaqMan探针应用宽泛。TaqMan探针的结构:长度与普通PCR引物类似,大约20bp左右。在5’与3’端各标记有一个荧光基团,5’的荧光基团称为报告基团(Report),3’的荧光基团称为淬灭基团(Quencher)。TaqMan探针的性能:在探针结构完整的情况下用特定的波长激发报告基团,由于报告基团与淬灭基团的空间位置很近,因此报告基团能够通过FRET(FluorescenceResonanceEnergyTransfer)将接受的能量转移到淬灭基团,使后者以发射荧光或热量的方式释放能量,而报告基团并不发射特定波长的荧光信号。许多宠物医生表示自己在工作中已经离不开PCR仪的帮助了。
现今,很多宠物医院都升级引入了PCR院内自测设备。PCR检测高效非常精细,具有高度灵敏性和特异性,特别适用于犬猫传染性疾病的诊断。可以规避传统检测方法的缺点(如试纸检测中结果的假阳性与假阴性)从而得到精细的诊断结果,临床中特别适用于刚刚到家的爱宠或者接触过传染病患宠的传染病排查。PCR检测技术可以实现对疾病的精细快速诊断,为宝贝争取比较好诊疗时间。巧亦捷动物诊断的薄膜微流控核酸一体机设备,测速快,通量大,操作简单,独、家**技术防污染,可实现多项目联检,可满足临床多样本同时检测,因此,核酸检测是医生及宠主对爱宠进行常规体检的常检项目!其实PCR在技术上仍有突破空间,巧亦捷核酸检测一体机已可以实现多重检测。江苏薄膜微流控PCR技术
常用的qPCR方法有荧光染料法(SYBR Green I)和探针法(TaqMan)。薄膜微流控PCR仪器生产公司
巧亦捷核酸检测一体机有以下几点优势:1)、灵敏度高,显1著缩短窗口期,解决了潜伏期检测不出的问题。由于PCR的检测域远比测试纸广,在机体带毒的早期阶段(潜伏期),虽然病毒快速繁殖,但是测试卡却无法检出,巧亦捷核酸一体机就不存在潜伏期检测不出的问题;2)、特异性好:巧亦捷使用荧光探针技术,几乎没有方法学的假阳性;可直接揭示病原体的存在;3)、检测所需样本量少:只要少量的血液(0.2cc),少量的口鼻分泌物,就可以做出多个疾病项目;4)、用于体检筛查:特别是体弱或者老年动物,定期的体检筛查显得格外的重要,使用巧亦捷核酸一体机可协助医师早期发现疾病,把疾病消灭在早期阶段,延长宠物的寿命,从而提高从宠物福利;5)、用于鉴别诊断:当临床上出现类似症状的疾病时,核酸一体机可协助医师做出准确的诊断,提高临床的诊断率和治、愈率。薄膜微流控PCR仪器生产公司