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何谓热灭活一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和焕活。有必要做热灭活吗?实验显示,经过正确处理的热灭清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会明显的增多,这些沉淀物在倒立显微镜下观察,像是"小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。购买的时候注意询问厂家是否是已灭清。在对细胞和活疫苗进行支原体检验中,《兽药典》也明确推荐了猪血清作为支原体检验用液体培养基的组成成分。连云港胎牛血清生产商

血清的分类根据取血年龄的不同,血清有以下分类:取血牛龄主要受当地畜牧业发展情况及法规限制影响,因为牛血多为畜牧业副产业,并未有专为取血而养的牛。01胎牛血清(FetalBovineSerum,简称FBS)取自尚未出生,母牛剖腹心脏穿刺取血得到的血清。02国产胎牛血清(并无准确定义,但通常以此命名)出生4-6小时,未进行哺乳进食的新生牛,也有称作国产新生牛血清。03新生牛血清(NewbornCalfSeurm,简称NBCS)也有称作小牛血清,指的是出生14天-90天的进行取血的牛血清(也有说是指出生10天-90天)。04成年牛血清(AdultBovineSerum,简称ABS)指取血时牛龄超过6个月的牛血清。连云港胎牛血清生产商所有的血清可能保留一些纤维蛋白原。

常规细胞培养需要添加血清来维持细胞的增殖能力,尽管血清可以满足一般细胞培养需求,但在进行营养成分优化和标记特定成分进行研究的实验中,仍需要去除某些特定的成分,常用的去除方法有透析。透析是将血清循环通过中空纤维,并在血清中补充生理盐水以维持渗透压,移除分子量小于10,000Da的小分子,如氨基酸、葡萄糖、盐离子和未结合的蛋白等。因此透析胎牛血清主要用于关注小分子浓度的特殊研究,包括:研究蛋白质组学、同位素标记、细胞信号传导和报告基因分析、报告基因细胞系的筛选等。

血清在细胞培养中为细胞提供氨基酸,蛋白质,维生素(特别是脂溶性维生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,,生长因子,矿物质及微量元素。此外,血清还可以缓冲培养基,抑制蛋白水解酶,增加培养基的粘度,降低在移液或搅拌时造成的剪切力。血清的保质期是5年,储存温度-10~-30℃。血清长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,长期保存血清必须在-10℃以下储存,并避免反复冻融。物种来源相同的血清,根据采集血时间、血源品质也会分出不同的类别。

保存注意事项:血清的保存应该注意以下几点:(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.(2)热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物明显增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.富含一些可供贴壁细胞型细胞贴壁生长的基质成分。郑州牛血清批发商

部分细胞原代提取时会使用20%血清,大部分细胞正常培养时会使用5%~10%的血清浓度。连云港胎牛血清生产商

避免产生沉淀物1、解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃,实验显示非常容易产生沉淀物。2、解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。5、若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。连云港胎牛血清生产商

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