细胞焦亡的机制中GSDMD的切割,IL-1β和IL-18前体的切割成熟和释放是关键信号,因此证明所诱发的细胞死亡方式是否为细胞焦亡,需要几个关键的实验证据:(1)GSDMD的切割(Western检测);(2)Caspase的激huo,主要是Caspase-1,Caspase-4,Caspase-5,Caspase-11。(Western检测);(3)IL-1β和IL-18前体的切割成熟和释放(Western,ELISA等);(4)细胞形态学检测(CCK-8等);(5)染色质完整性检测(Tunel等)。完整检测方式如下:1、形态变化(1)扫描电镜观察细胞形态;(2)免疫荧光染色(GSDMD/GSDME);(3)Tunel检测。2、检测焦亡相关基因及蛋白(1)q-PCR/WesternBlot方法检测焦亡相关基因或蛋白的表达水平(例如,Caspase-1、4、5、11;GSDMD;CleavedCaspase-3、IL-1β、IL-18、NLRP3、ASC等);(2)ELISA试剂盒检测炎症因子的水平;(3)CCK8法测定细胞活力;(4)免疫组化检测组织蛋白的表达Caspase和Gasdermin家族蛋白在细胞焦亡过程中发挥重要作用。江苏专业检测细胞焦亡实验参考价格
细胞焦亡发生时,细胞肿胀,细胞膜上形成众多直径为10~15nm的孔隙,膜的完整性被破坏,失去调控物质进出细胞的能力,细胞膜溶解,释放出细胞内容物,诱发炎症反应。早期焦亡可帮助机体清chu病原体,预防感ran性疾病的发生,然而过度的免疫反应导致炎症因子大量爆发,引起大规模的细胞焦亡,导致多qi官功能障碍,甚至危及生命。细胞焦亡及释放的促炎症细胞因子广fan参与多种疾病的发生过程,与感ran性、神经系统、心血管、免疫性及代谢性等疾病密切相关。细胞焦亡研究发现,在ROS及细胞dusu的作用下,JNK激酶被jihuo并转移到细胞核内,促进细胞焦亡相关基因的表达。
与细胞凋亡相比,细胞焦亡是由炎症性caspase(Caspase-1, 4, 5, 11)诱导的一类坏死性和炎症性的细胞程序性死亡。相比于细胞凋亡,细胞焦亡发生的更快,并会伴随着大量促炎症因子的释放。由于细胞焦亡需要炎症性caspase的参与,其与另一种坏死性和炎症性的细胞程序性死亡方式—坏死性凋亡不一样,坏死性凋亡发生不需要caspase的参与。Nature:化疗药物通过Caspase-3切割GSDME诱导细胞焦亡2017年5月1日,Nature发表了邵峰的一项重要研究成果,报道发现化疗药物诱导Caspase-3切割GSDME,实现细胞凋亡向细胞焦亡的转变。被Caspase-3切割后的GSDME的N端多肽也可以形成孔道,导致炎症性细胞因子的释放。GSDME在正常组织中有一定的表达水平,但经常在肿瘤细胞中表达沉默。GSDME敲除小鼠对一些化疗药物(如顺铂)诱发的组织损伤具有一定的抵抗能力。本文的工作发现了细胞凋亡的执行者Caspase-3切割GSDMD同家族的另一成员GSDME,可以实现细胞凋亡-细胞焦亡的转变。
巨噬细胞焦亡可能与AS晚期坏死核xin的形成及斑块不稳定有关。电镜观察显示,在晚期斑块组织的死亡细胞中,巨噬细胞占比很大,斑块内Caspase-1、IL-1β、IL-18的表达量增高,且表达量与斑块稳定性呈负相关。IL-1β、IL-18等炎症因子发挥损伤作用的同时,会进一步募集炎症细胞,加重病灶炎症反应。此时基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)的表达也随细胞焦亡炎症反应而增加。MMP可降解细胞外基质及斑块纤维帽,使斑块组织中炎症因子扩散至周边正常组织,以此增大斑块面积,促进AS的发展和斑块的不稳定。一些降糖药可通过抑制细胞焦亡来改善糖尿病性心肌病的心功能。
2型糖尿病是一种无菌性炎症疾病,肥胖诱导的胰岛素抵抗和胰腺中胰岛B细胞功能的紊乱是其主要的特征。此外,还可在胰腺中观察到胰岛淀粉样多肽的聚积,它容易被树突状细胞和巨噬细胞摄取。研究显示,用人胰岛淀粉样多肽刺激致敏骨髓源性树突状细胞和巨噬细胞可引起NLRP3的活化,进而激huocaspase-1,引起IL-1B的产生;而这一炎症过程的产生引起了细胞焦亡,并促进了2型糖尿病的进展与胰岛素依赖性糖尿病的发生。在肥胖的小鼠和人类的脂肪组织与肝脏中NL—RP3炎症小体(NLRP3、ASC和caspase-1)的表达增加,而且表达水平的高低直接与2型糖尿病的严重程度相关。细胞焦亡的发生和表现形式与肝、肾疾病及脑损伤、糖尿病等发生相关。河南整体实验细胞焦亡实验参考价格
细胞焦亡是细胞感ran时由炎症小体介导,以裂解细胞为特点的程序性死亡形式。江苏专业检测细胞焦亡实验参考价格
炎症小体通过AIM2识别到小鼠巨细胞病毒的双链DNA后也能在体外诱导细胞焦亡。体内研究则表明Aim2“一小鼠对巨细胞病毒易感。然而,这个易感性是来自于细胞焦亡、IL-1B还是IL-18,这有待进一步研究。相反地,在HIV感ran时细胞焦亡则起到了一个有害的作用。AIM2样受体——IFN-1诱导蛋白16(IFll6)诱导未感ranHIV的CIM+T细胞发生焦亡,这被认为是HIV清chu体内CD4+T细胞的主要途径;而且证实在这些CIM+T细胞中caspase-1表达增加,且IL-1B、IL-18的分泌均有明显的增加。江苏专业检测细胞焦亡实验参考价格
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