为什么要做宿主细胞残留DNA检测?众所周知,大部分生物制剂是不经过胃肠道直接进入体内,所以除了生物活性外,相关部门对药品中杂质的含量要求非常严格。其中,宿主细胞残留DNA因为具有特别的潜在安全风险,一直是监管机构关注的重点。生物制品中的重组蛋白药、抗体药、疫苗等产品是用连续传代的动物细胞株表达生产,虽然经过严格的纯化工艺,但产品中仍有可能残余宿主细胞DNA。这些残余DNA可能带来传染性或致瘤性风险,比如残留DNA可能携带HIV病毒或Ras ai基因。如何高效完成宿主细胞残留DNA检测?上海E1A残留DNA检测注意事项
各国药品监督管理机构对生物制品中宿主细胞残留DNA检测的要求:各国药品监督管理机构对生物制品中宿主细胞残留DNA的态度谨慎且明确,要求各制药企业建立详细可行、灵敏度高的检测方法,用于验证药品的纯化过程可以去除残留DNA,并对终产品的产品放行严格把关,避免携带外源DNA的药品流入市场。与此同时,残留DNA的检测方法也在不断升级和改进,研究者们旨在能够更精确更快速地检测含量较低的宿主DNA。我国对宿主细胞残留DNA检测的规定:鉴于外源性DNA对机体的潜在危害,自19世纪末,我国药品相关机构,如卫生部、国家药品监督管理局等颁布的一系列文件中都对残余细胞DNA有明确的规定。《人用重组DNA制品质量控制要点》中要求必须用敏感的方法测定来源于宿主细胞的残余DNA含量,这对于用哺乳动物传代细胞(转化的细胞系)生产的制品尤为重要,一般认为残余DNA含量小于100pg/剂是安全的,但应视制品的用途、用法和使用对象而决定可接受的限度。郑州毕赤酵母残留DNA检测产品生物制品中宿主细胞残留DNA检测概述。
实时荧光定量PCR(qPCR)技术在生物制品质量控制方面应用非常普遍,如宿主细胞残留DNA检测,鼠源、禽源等外源病毒检测,微生物快检(支原体、分枝杆菌、细菌、zhen菌等),复制型病毒检测(RCL、RCR、rcAAV等)、质粒拷贝数检测及其它工艺杂质检测等。qPCR检测结果以扩增曲线图呈现,正常扩增曲线为S型,分为基线期、指数扩增期、线性扩增期和平台期;线形光滑、拐点清晰,基线平直或略微下降,无明显上扬。定量检测实验中,对标曲的要求主要从斜率(与扩增效率相关)和R²两方面进行考察,要求斜率满足-3.8~-3.1(对应扩增效率为83.3%~110%),R²满足高于0.99。
用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时,出现扩增效率超出标准要求(低于83.3%或高于110%)的原因有哪些?①设计的引物探针不适用:重新分析靶标序列进行设计。②标曲浓度设定太高,超出标曲线性范围:对范围进行验证,选取合适标曲范围。③人员操作问题,如稀释错误、制备过程震荡时间过长等:人员上岗前应接受培训并做到熟练操作,考核合格后方可上岗。④移液器未校准或品质问题导致量取不准:定期对移液器进行校准并选择好品质移液器。
用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时,出现扩增曲线异常的可能原因是什么?①软件参数设置不当可能引起标曲参数或检测结果异常。如扩增曲线信号蕞早出现在14个循环左右,基线却设置为3-15,导致仪器将14个循环出现的荧光信号默认为基线部分,出现结果异常。建议将BaselineEnd设置为扩增信号出现的前一个循环,或由软件自动设置。②扩增曲线飘起:该现象通常出现于高浓度模板情况下,扩增曲线Ct值在10以内的样品。针对此类样品检测,设置标曲时建议尽量控制标曲蕞高浓度Ct值控制在10以上。检测样品时建议对样品进行稀释后再测试。 Vero宿主细胞残留DNA检测的质量控制。
宿主细胞残留DNA检测在动物源性生物材料领域的应用及要求:参考YY/T0606.25-2014《组织工程医疗产品第25部分:动物源性生物材料DNA残留量测定法:荧光染色法》中的要求,动物源性基质材料的脱细胞过程被认为是非常重要的,残留DNA定量检测是评价脱细胞过程及控制产品质量的重要措施之一。但需要留意的是在去细胞化的过程中引入的添加物如:化学试剂、核酸酶、蛋白酶等会影响产品蕞终质量,也应当引起重视。用qPCR进行宿主细胞残留DNA检测时,哪些因素会对检测结果准确性和方法灵敏度存在较大影响?前处理过程杂质干扰的去除对qPCR法宿主细胞残留DNA检测结果有着较大影响。样品的前处理操作步骤对DNA检测结果的准确度影响较大,通常采用加样回收试验来进行验证并确定可接受的偏离限度,内标回收率在50-150%的范围内都可以接受。样品提取步骤较为复杂,需要特别注意,操作不当不但可能影响回收率还可能引入环境污染。HEK293宿主细胞残留DNA检测的质量控制。郑州毕赤酵母残留DNA检测产品
生物制品中宿主细胞残留DNA检测的要求。上海E1A残留DNA检测注意事项
宿主细胞残留DNA检测的重要性:众所周知,通过细胞培养生产生物制品时,需要在下游工艺中去除所有的源于宿主细胞残留的杂质,如胞质蛋白、基因及潜在病毒等。其中宿主细胞DNA残留问题受到了制药同行很大的关注。究其原因,在于生物制品中即便是微量地来源于宿主细胞的外源性DNA都有传递仲瘤或病毒相关基因的可能性。如果生物制品在携带残留DNA的情况下注射进入患者的体内,如果细胞DNA为致ai基因,具有致瘤性,在患者体内生成仲瘤;如果为病毒基因,不排除该基因扩增并组装的可能,威胁患者的健康。总之,宿主细胞残留DNA的潜在危害不容小觑,通过去除宿主细胞DNA预防可能出现的不利后果是极为必要的。如今,宿主细胞残留DNA已作为生物制品安全性评价的一个重要指标。上海E1A残留DNA检测注意事项
宿主细胞残留DNA检测数据分析环节报错信息中的NOSIGNAL什么含义怎么解决?NOSIGNAL:这...
【详情】荧光探针法用于宿主细胞残留DNA检测的原理是:选择只能染色双链DNA的特异性荧光染料,染料与双链DN...
【详情】南京正扬生物科技有限公司的E.coli残留DNA检测试剂盒,基于TaqMan荧光探针法qPCR原理,...
【详情】宿主细胞残留DNA检测数据分析环节报错信息中的EXPFAIL什么含义怎么解决?EXPFAIL:表示指...
【详情】在做宿主细胞残留DNA检测实验的时候加标对照组是必须要做的一个对照组,可根据后加标对照组的结果计算加...
【详情】在生物制品的研发与生产过程中,宿主细胞残留DNA是影响其纯度与安全性的关键因素之一,宿主细胞残留DN...
【详情】使用南京正扬生物科技有限公的宿主细胞残留DNA检测试剂盒的注意事项有哪些?1、在收到试剂盒的时候一定...
【详情】由于宿主细胞残留DNA具有严重的潜在风险,所以为确保生物制品的安全性和质量,因此建立合适的宿主细胞残...
【详情】宿主细胞残留DNA检测数据分析环节报错信息中的THOLDFAIL什么含义怎么解决?THOLDFAIL...
【详情】宿主细胞残留DNA检测实验中数据分析环节,报错信息中的BADROX是什么含义怎么解决?BADROX:...
【详情】南京正扬生物科技有限公司的SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒,基于TaqMan荧光探针法qP...
【详情】在宿主细胞残留DNA检测实验中容易遇到的问题有哪些?1、标曲不理想。导致标曲不理想的原因主要有试剂与...
【详情】