美国药典(USP)对宿主细胞残留DNA检测的规定:美国食品药品监督管理局(FDA)发布的指导原则中指出生物制品宿主细胞DNA残余限度不得超过100pg/剂量,对于大剂量的如单克隆抗体的生物制品,根据其残余DNA来源及给药途径,DNA残留量可放宽至10ng/剂量。《美国药典》(USP40-NF35)通则<1130>收录了3种外源性DNA残留量测定的方法,分别为DNA探针杂交法、阈值法和实时定量聚合酶链式反应(PCR)法。
欧洲药典(EP)对宿主细胞残留DNA检测的规定:欧洲药品管理局指出需要对连续传代哺乳细胞残留DNA的去除过程进行工艺验证,旨在确认去除残留DNA的主要步骤,并确保此工艺程序可以将终产品中的残留DNA控制在允许范围[4]。《欧洲药典》(EP9.3)通则规定的生物制品残留DNA限度大多为不超过10ng/剂量,但对个别疫苗的残留DNA限定标准更严格,如甲型肝炎灭活疫苗中的残留DNA不得超过100pg/剂量,乙型肝炎疫苗中的DNA残留量不得超过10pg/剂量。 哪些公司有Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒?宁波E1A残留DNA检测注意事项
用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时,出现扩增效率超出标准要求(低于83.3%或高于110%)的原因有哪些?①设计的引物探针不适用:重新分析靶标序列进行设计。②标曲浓度设定太高,超出标曲线性范围:对范围进行验证,选取合适标曲范围。③人员操作问题,如稀释错误、制备过程震荡时间过长等:人员上岗前应接受多面培训并做到熟练操作,考核合格后方可上岗。④移液器未校准或品质问题导致量取不准:定期对移液器进行校准并选择好品质移液器。合肥质粒残留DNA检测服务哪些公司有HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒?
南京正扬生物科技有限公司自主研发生产了一款E.coli宿主细胞残留DNA检测试剂盒,采用qPCR-荧光探针法,在qPCR技术的基础上利用荧光探针原理,定量检测样本中E.coli残留DNA,简化qPCR反应操作的反应液配置时的操作步骤,检测快速,专一性强,性能可靠,蕞低检测限可以达到fg水平。实验操作步骤包括标准品稀释、样品前处理、样品DNA提取纯化、PCR试剂配制及加样、PCR扩增检测、实验数据分析。
宿主细胞残留DNA检测过程中,标准品稀释环节有哪些注意事项?①用来做稀释的耗材建议使用1.5mL离心管,容量太大的耗材会增加DNA的吸附作用,容量太小易导致混匀不充分。②为了做出更好的线性,进行倍数稀释的时候要吸取较大体积标准品溶液(避免用1μL标准品+9μL稀释液这样的小体积体系进行稀释)。③每进行一步稀释都要进行充分的混匀,在点样前也要进行混匀。④为了提高准确性,每个浓度建议做3个复孔。
宿主细胞残留DNA检测的方法介绍:①荧光探针qPCR法:可进行定量分析,被USP/EP/ChP收录,检出限可低至1pg/Sample,蕞小检测片段可至50bp,该检测方法具备灵敏度高、特异性高、通量高的特点,但是成本相对其他方法略高。②荧光染色法:该方法可进行定量分析,被USP/ChP收录,样品残留量需达到50pg/Sample才能被检测,蕞小检测片段为100bp,该检测方法缺乏序列特异性,但是成本较低。宿主细胞残留DNA检测的方法介绍:①免疫阈值法:该方法可进行定量分析,被USP/EP收录,检出限低至3pg/Sample,蕞小检测片段为100bp,该检测方法是对非特异性序列进行免疫检测,很可能会出现检测值虚高的情况,存在检测局限性。②DNA探针杂交法:只能进行半定量分析,被USP/ChP收录,检出限低至6pg/Sample,蕞小检测片段为50bp,该检测方法存在32P标记的探针半衰期短、放射等问题。国家对Vero宿主细胞残留DNA检测的要求有哪些?
现行《中国药典》的qPCR检测法中,针对不同的疫苗,其宿主DNA残留量有不同的要求,比如基于vero细胞的狂犬疫苗,DNA残留含量要求不高于3ng/剂,基于vero细胞的脊髓灰质炎疫苗,DNA残留量不高于50pg/剂,基于CHO细胞的乙肝疫苗,DNA残留量不高于10pg/剂。因此,宿主细胞残留DNA间测对于试剂和仪器的检测灵敏度都提出了极高的要求。而要准确检测出宿主DNA残留量,则需要采用标准曲线的觉对定量方法,根据《中国药典2020》对残留DNA检测方法的要求,其标准曲线要求R2≥0.98,斜率在-3.1到-3.8范围内,每组加标样品回收率在50%-150%之间,RSD≤30%。如何高效完成宿主细胞残留DNA检测?合肥质粒残留DNA检测服务
Vero宿主细胞残留DNA检测的质量控制。宁波E1A残留DNA检测注意事项
用qPCR进行宿主细胞残留DNA检测时,哪些因素会对检测结果准确性和方法灵敏度存在较大影响?参考品DNA量值溯源及质量保证:参考品DNA的量值准确与否,直接关系到样品检测结果的准确性,因此需制定完善的参考品量值溯源程序,确保结果准确可靠。参考品DNA的质量要求可从条带大小、完整性、纯度、浓度等方面做多面评估,细胞来源的参考品应考察支原体污染,质粒参考品应考察质粒宿主E.coli基因组DNA残留情况等,尽量排除干扰确保结果准确可靠。宁波E1A残留DNA检测注意事项
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