《中国药典》2020版已收载三种方法用于外源性宿主细胞残留DNA检测,其中较为常用方法的为qPCR技术,该方法不仅可准确定量,且灵敏度较高可达到fg级,很大提高检测的准确性。但因其需精密和昂贵的qPCR仪、相关检测试剂盒价格较高,较难在基层及偏远地区实施,且其有着复杂的样品前处理和相对较长的检测时间,应用于快检的难度比较大。对于企业生产实时监控而言,特别需要一种可以快速的,低廉的试剂盒,其可以检测抗体中残留DNA是否符合标准,同时不需要昂贵的设备。宿主细胞残留DNA检测。宁波E1A残留DNA检测服务
为什么要做宿主细胞残留DNA检测?近年来热度骤增的生物制品药物对诸多疾病疗效斐然,在药品市场中所占比重也是节节攀升。于是生物制品与之俱来的生物安全性问题被渐渐提上日程,其中宿主细胞残留DNA由于可能会传递仲瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性,各国药品监督管理机构对其残留量有着严格的限度控制。同时,各国药典也陆续提供数种关于宿主细胞残留DNA检测经典的方法,目前以实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法为优,因其专一性强、灵敏度高、快速且可实现高通量。宿主细胞残留DNA检测的重要性:众所周知,通过细胞培养生产生物制品时,需要在下游工艺中去除所有的源于宿主细胞残留的杂质,如胞质蛋白、基因及潜在病毒等。其中宿主细胞DNA残留问题受到了制药同行很大的关注。究其原因,在于生物制品中即便是微量地来源于宿主细胞的外源性DNA都有传递仲瘤或病毒相关基因的可能性。如果生物制品在携带残留DNA的情况下注射进入患者的体内,如果细胞DNA为致ai基因,具有致瘤性,在患者体内生成仲瘤;如果为病毒基因,不排除该基因扩增并组装的可能,威胁患者的健康。总之,宿主细胞残留DNA的潜在危害不容小觑,通过去除宿主细胞DNA预防可能出现的不利后果是极为必要的。如今。宿主细胞残留DNA检测常见问题如何做好生物制品宿主细胞残留DNA检测?
用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时,出现扩增曲线异常的可能原因是什么?①软件参数设置不当可能引起标曲参数或检测结果异常。如扩增曲线信号蕞早出现在14个循环左右,基线却设置为3-15,导致仪器将14个循环出现的荧光信号默认为基线部分,出现结果异常。建议将BaselineEnd设置为扩增信号出现的前一个循环,或由软件自动设置。②扩增曲线飘起:该现象通常出现于高浓度模板情况下,扩增曲线Ct值在10以内的样品。针对此类样品检测,设置标曲时建议尽量控制标曲蕞高浓度Ct值控制在10以上。检测样品时建议对样品进行稀释后再测试。
宿主细胞残留DNA是指可能出现于生物制品中由宿主组织细胞产生的DNA片段或更长分子。目前,生物制品常用宿主包括:哺乳动物细胞系中的幼仓鼠肾细胞系、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、非洲绿猴肾细胞(Vero)、小鼠骨髓瘤NS0细胞系、人胚肾细胞系(HEK-293)、酵母菌和大肠杆菌等。重组蛋白药、抗体药、疫苗等生物制品由连续传代的微生物或动物细胞生产,虽然经过复杂的纯化工艺,但产品中仍可能有宿主细胞残留DNA。残留的宿主细胞DNA一般有相同的基本结构单位,但存在的长度和形式各异,它们均可导致传染性、致ai性、免疫原性和突变性等风险;鉴于上述风险,国内外监管部门分别出台了相应的指导原则并提供了宿主细胞残留DNA检测的方法。宿主细胞残留DNA检测试剂盒的价格。
qPCR法宿主细胞残留DNA检测的原理:PCR反应过程中可通过荧光标记的特异性探针检测PCR产物量。带有一对荧光分子的探针与样品中DNA通过碱基互补配对的原则结合,随着PCR反应的进行,Taq聚合酶合成DNA,同时沿5’-3’方向水解DNA探针,一对荧光分子随着探针的水解而分开,发出荧光信号。通过连续监测反应体系中荧光读数的变化,可即时反映特异性扩增产物量的变化。在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时,体系的PCR循环数(Ct值)与该体系所含的起始DNA模板量的对数值呈线性关系。采用已知浓度的DNA标准品构建标准曲线,由此计算样品中的DNA残留量。Vero宿主细胞残留DNA检测。深圳E.coli残留DNA检测公司
生物制品中宿主细胞残留DNA检测的要求。宁波E1A残留DNA检测服务
为什么要做宿主细胞残留DNA检测?近年来热度骤增的生物制品药物对诸多疾病疗效斐然,在药品市场中所占比重也是节节攀升。于是生物制品与之俱来的生物安全性问题被渐渐提上日程,其中宿主细胞残留DNA由于可能会传递仲瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性,各国药品监督管理机构对其残留量有着严格的限度控制。同时,各国药典也陆续提供数种关于宿主细胞残留DNA检测经典的方法,目前以实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法为蕞优,因其专一性强、灵敏度高、快速且可实现高通量。宁波E1A残留DNA检测服务
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