在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果比单波长测量明显好转。由于液体表面张力的不同，导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到加入底物和终止液后的液面情况，用加入表面活性剂的洗涤液清洗后，形成的液面更凹，对单波长检测的影响更大，并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后，单、双波长检测的结果基本一致。利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。建议在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该优先双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度，减少实验误差。
TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有比较大消光系数，如果HRP量少，H：O：和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌，使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min。因此，450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件，可以同时安装6～8片滤光片，所配备的滤光片均应包括上述两个波长，有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片，影响不大。除了这两个基本滤光片外，考虑到双波长比色的需要，还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片，其他滤光片可根据自己的需要选择。有时，有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定，故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能，此时需要一个340 nm波长滤光片。此时，酶标仪的测定波长范围就成为340—750nm或800nm。K3 Plus酶标仪的通用内置软件允许采用终点法及动力学读取模式。
酶标仪常用波长为：405nm，450nm，490nm与630nm。湖南双检测模式酶标仪酶联免疫
酶标仪在血液检验上的应用：丙氨酸氨基转移酶(ALT)的测定，是对献血者不可缺少的筛查项目之一。方法上有速率法和赖氏法等。若采用赖氏试管法，费工、费时，不但从方法上得不到统一，而且不利于计算机对原始数据的网络化管理。若采用微板酶标仪定量(U/L)方法，利用酶标仪与计算机接口，联接血站局域网络，这就同其他酶法检测项目一样，实现了实验室原始数据的计算机管理[3]。采用试管法检测Rh血型，操作繁锁，肉眼判读结果缺乏客观性。故将平底微板法与酶标仪扫描，电脑自动判读打印技术相结合，用TCEAN全自动加样分析系统完成。经常规13032份标本的检测，符合率达100%[4]。利用酶标仪法检测Rh血型具有较好的重复性、准确性，操作简便快速、判读结果客观可靠，也易于原始结果的保存，提高自动化程度，能的筛选献血者，有利于实验室的标准化管理，也有利于血站稀有血型库的建立。湖南双检测模式酶标仪酶联免疫
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