在用酶联免疫法测定抗原或抗体时,不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式,并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择,对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解,***咱们就来了解一下这两个测量方法。酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同,一般分光光度计是水平光路,而酶标仪则是垂直光路,但测定原理相同,都是使用朗伯-比耳定律,测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小,不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。可见光和紫外光酶标仪分别采用钨灯及氘灯作为光源。贵州酶标仪样品检测
尽管酶标仪的发展极为快速,种类繁多,功能也不断加强,但其*根本的功用是不变的,即比色测定。大凡比色测定,其基本要求就是在一定吸光度范围内要有好的测定准确性、线性和精密性。同样的吸光度范围,测定的准确性、线性和精密性越好则酶标仪亦越佳。而且,由于用于酶标仪比色测定的为多孔(通常为96孔)微孔板条,为保证测定的孔间重复性,则测定速度也是一个较重要的性能指标。至于其他如震板、温育及有关的软件功能,则可根据各自实验室的需要去比较选择。K3 Plus酶标仪扩展内存可以储存多达500个测定方法。
目前在国内血站临床试验室中酶标仪成为 ELISA 测定的重要工具。贵州酶标仪样品检测
一般酶标仪的测定波长在400~750nm或800nm之间,完全可以满足ELISA的显色测定。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP),底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD),其在过氧化氢溶液的存在下,经HRP作用,分别氧化为2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5.0左右时,DAB在450nm波长处有比较大吸收,当pH值降为L 0时,比较大吸收波长移至492 nm,同时摩尔消光系数变大,显色加深,因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。贵州酶标仪样品检测
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