外泌体分离方法之亲和层析分离法：在亲和层析分离法方面，主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素将结合存在于外泌体表面的糖基化蛋白质，从而使外泌体沉淀。Vn肽分离技术基于其对含有HSP的细胞外颗粒的高亲和力。然而，这种方法比较容易使提取物被膜表面上含有上述标记物的细胞和其他颗粒污染。外泌体分离方法之介电泳分离法：介电泳分离法主要利用不同大小的粒子在不均匀电场中的位置差异。外泌体被吸引到高电区域，而较大的颗粒将位于低电区域。该方法速度快，适合用于高通量筛选，但缺点是需要加热。外泌体被发现在各种生物体中，包括哺乳动物、植物和微生物。石家庄肺泡外泌体
分离外泌体的方法之超滤：样品通过0.2μm聚醚砜（PES）膜过滤，较大的颗粒物质（如细胞碎片和凋亡体）被滞留出来。然后，包括外泌体在内的半处理滤液样品通过TFF系统通过500kDa截止滤芯进行超滤过程，进料流速为120mL/min，跨膜压力<3.5psi跨膜压力>10:1，外泌体太大而无法通过毛孔并保持保留。相反，包括游离蛋白在内的小分子通过中空纤维孔并作为渗透物洗脱并较终从过程中丢弃。为了获得高质量的外泌体分离和纯化，通过TFF连续重新浓缩截留物样品，并去除小于500kDa的污染物。较后，将纯化的外泌体重悬并储存在-80°C的聚对苯二甲酸乙二醇（PETG）瓶中的0.1M蔗糖中，并用于所需的分析。通常，通过结合超滤加超速离心或离心加超滤等不同分离方法可以成功分离外泌体，使用较低孔径的膜过滤和超速离心可提供纯外泌体。石家庄肺泡外泌体外泌体的转移涉及细胞因子、基质降解酶和细胞外基质重塑等多种调节步骤。
分离外泌体的方法之微流控分离：基于微流体的外泌体分离可以包括用于外泌体捕获的免疫亲和方法，纳米多孔膜筛分方法或微柱上的纳米线用于外泌体捕获。所有三个系统都需要具有粘弹性分析和电操作的芯片才能进行外泌体分离过程。外泌体的特异性很高，采用基于微流控芯片的免疫亲和捕获方法。尺寸范围在40-100nm之间的外泌体被这种微流体芯片特异性地捕获，在外泌体分离和定量方面的益处。筛分方法可用于通过压力或通过电泳从全血中过滤外泌体，压力的利用使分离时间更短，电场导致高外泌体纯度。特异性、可重复性、低分离时间和更低的分离成本是基于微流体的外泌体分离的一些优点。
分离外泌体的方法之降水：它是一种基于生物体液中外泌体的电荷沉淀的方法。带负电荷的外泌体可以与PEG35,000Da基质中带正电荷的鱼精蛋白相互作用并形成沉淀。外泌体的回收和重悬比基于超速离心的分离更有效。聚合物沉淀法以更少的劳动力和昂贵的设备分离尿外泌体的潜在益处。该方法首先利用DL-二硫苏糖醇溶液还原或去除Tamm-Horsfall蛋白的聚合网络，然后在25°C和30min下只用10,000×g的向心力即可实现外泌体的沉淀。还有利用聚合物沉淀方法并消除超速离心的商业试剂盒。ExoQuick™、Exo-spin™是来自Invitrogen™和miRCURY™的市售总外泌体分离试剂。外泌体分离和分析的标准化和规范化将有助于外泌体研究领域的进一步发展。
外泌体分离方法之超速离心法：超速离心基于颗粒的大小（重量）及其在离心力（100,000–110,000×g）下的离心沉降。至于去除的细胞碎片和不需要的颗粒可以通过称为差速离心的几步慢速离心来获得。外泌体的纯化可以采用蔗糖梯度密度离心纯化法：即：在蔗糖梯度(1.13–1.19g/mL)或缓冲液中进行，以实现更高的富集、产量和纯度增加。外泌体分离方法之微流控分离法：微流控分离法主要是在微芯片上进行的，这里我们需要提及的是，微流控分离法法可用于外泌体分离（免疫结合和磁结合、过滤），效率相对较高（约90%）。外泌体膜表面富含糖基化蛋白和糖基化脂质，这种糖基化在外泌体相互作用和定位中具有重要作用。快速提取外泌体分离芯片检测
外泌体分离方法的优化需要对比不同方法的纯度和收率。石家庄肺泡外泌体
分离外泌体的方法之免疫亲和相互作用：免疫亲和法是利用外泌体表面蛋白（抗原）与其靶抗体或分离配体分子之间的免疫亲和相互作用原理分离纯外泌体的理想方法。它有助于根据其表面标志物分离特定类型的外泌体。基于微孔板的酶联免疫吸附测定（ELISA）是免疫亲和分离试剂盒的一个例子，用于根据外泌体表面标志物分离外泌体。Tetraspanin蛋白是这种分离方法的决定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫亲和外泌体分离中使用的抗体的常见示例。免疫亲和法可用于从结肠病细胞中分离外泌体，其效率高于超速离心和密度梯度分离。另外还有一种外泌体分离方法，该方法采用抗体包被的基于磁性颗粒的技术来分离外泌体。石家庄肺泡外泌体
