外泌体的表征方法之非光学方法:非光学方法主要包括扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、冷冻电子显微镜(Cryo-EM)、原子力显微镜(AFM)、免疫检测方法(ELISA)、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、可调谐电阻脉冲传感(TRPS)和单粒子干涉反射成像传感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜结构和形态测定,而ELISA检测提供各种结构颗粒(主要是蛋白质和受体)的检测和量化,例如,用于外泌体形态的确认。单粒子干涉反射成像传感器(SP-IRIS)也用于外泌体定量,但也可用于检测特定标记物和确定外泌体亚群。外泌体是一种具有细胞外信息传递功能的小囊泡。青岛血浆外泌体生产商
外泌体的提取主要包括以下几种方式:一是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。二是微流控分离法,该方法通过负压及震荡等机械原理分离外泌体,产量纯度均具有较大幅度提高,但需要特定设备配合。外泌体分离方法之纳米粒径分析法:确定性横向位移依赖于颗粒流动路径的变化,而颗粒流动路径取决于颗粒尺寸。这种方法虽然比较简单,但是需要使用扫描电镜技术、动态光散射技术、纳米粒子跟踪分析技术、单粒子干涉反射成像传感器(SP-IRIS)技术等。对于外泌体大小、形态、外泌体的浓度、zeta电位等分析也可以使用粒度分析仪。扬州外泌体分离分离外泌体后需要通过电镜等方式进行鉴定。
外泌体分离方法之尺寸排阻层析法:尺寸排阻层析法也被称为凝胶过滤层析法,这种方法是基于凝胶孔的大小和外泌体的大小,大于凝胶孔径的颗粒被洗脱;反之,小于凝胶孔径的颗粒将被抑制。凝胶过滤层析分离法总体上能获得较高的纯度和产量。建议与超滤相结合,这种方法可提供更少的蛋白质污染和更高的外泌体回收率。凝胶过滤层析分离法的缺点是凝胶的成本过高。外泌体分离方法之声学流体分离:声学流体分离技术利用声场根据粒子的大小、密度和可压缩性来分离粒子。生物样品在此过程中不会受到损坏,并且分离的本身是非接触式、高效的和无标记的。
外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法,这是外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块,由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心,这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法,用此种方法分离到的外泌体纯度高,但是前期准备工作繁杂,耗时,量少。外泌体与胚胎学密切相关,参与人类胚胎发育和胚胎起始过程中的各种调节作用。
外泌体是由正常或病理条件下的细胞所分泌,含有各种膜蛋白和胞质蛋白。因此,外泌体蛋白也可以作为生物试剂潜在地用于蛋白诊断。外泌体中发现的十种蛋白质主要包括热休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌动蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、烯醇化酶1α、细胞溶质热休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶打开蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌体蛋白属于各种功能组,例如四跨膜蛋白(CD9、CD63和CD81)、热休克蛋白(HSC70和HSC90)、膜转运蛋白(GTPases)和脂质结合蛋白。外泌体标记物及其在免疫组织化学、免疫细胞化学、流式细胞术和ELISA等抗体应用中的常用的单克隆抗体。发现外泌体转移可能为疾病治着和预后提供新的治着策略。武汉快速提取外泌体多少钱
外泌体可以作为一种新型的药物输送系统,利用其高度选择性的靶向性,有效地提高药物的生物利用度。青岛血浆外泌体生产商
外泌体分离方法之过滤法:超滤膜也可用于外泌体的分离。根据微泡的大小,使用超滤膜过滤的方法可以将外泌体与蛋白质和其他大分子分离。外泌体也可以通过多孔结构捕获它们来分离。常见的过滤膜孔径为0.8m、0.45m或0.22m,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌体。比如微柱多孔硅纤毛结构一般用于分离40-100nm外泌体。在初始步骤中,去除较大的囊泡。在接下来的步骤中,外泌体会群集中在过滤膜上。隔离步骤相对较短,但该方法需要用PBS缓冲液对硅结构进行预孵育。除标准过滤技术外,切向流过滤在有效分离外泌体方面也有着尝试应用,通过切向流过滤技术去除游离肽和其他小化合物从而分离具有确定大小的外泌体。此外,在体外研究和脂肪组织中,也会采用超滤与SEC的结合的方式来分离外泌体。通过(a)对片上过滤器施加压力或(b)产生电场,迫使外泌体穿过多孔膜,结合错流和电泳分选来完成筛分。青岛血浆外泌体生产商
苏州英泽生物医药科技有限公司汇集了大量的优秀人才,集企业奇思,创经济奇迹,一群有梦想有朝气的团队不断在前进的道路上开创新天地,绘画新蓝图,在江苏省等地区的医药健康中始终保持良好的信誉,信奉着“争取每一个客户不容易,失去每一个用户很简单”的理念,市场是企业的方向,质量是企业的生命,在公司有效方针的领导下,全体上下,团结一致,共同进退,**协力把各方面工作做得更好,努力开创工作的新局面,公司的新高度,未来苏州英泽生物医药科技供应和您一起奔向更美好的未来,即使现在有一点小小的成绩,也不足以骄傲,过去的种种都已成为昨日我们只有总结经验,才能继续上路,让我们一起点燃新的希望,放飞新的梦想!