外泌体是直径为30-150nm的小细胞外囊泡。在生理和病理条件下，几乎所有类型的细胞都可以释放外泌体，在细胞通讯和表观遗传调控中发挥重要作用。外泌体天然存在于体液中，包括血液，唾液，尿液和脑脊液等，内部含有其来源细胞的核酸，蛋白等物质，因此基于外泌体的疾病诊断和治着方法得到了深入的研究。但是如何拿到纯净的外泌体一直是外泌体研究所面临的难题之一，因此研究人员也开发了许多外泌体分离的方法，来一起看一下吧。差速离心法：离心力从300×g到100,000×g的下进行多次循环离心，较后收集外泌体颗粒。密度梯度离心法：等密度梯度超速离心法是通过从下到上逐步降低密度分层。动区梯度超速离心法由两个梯度介质部分组成，样品根据密度/质量/大小被依次分离。可将不同分离方法结合使用，以提高外泌体分离的效率和分离精度。南昌外泌体分离蛋白检测
外泌体分离方法之密度梯度离心法：这种方法将超速离心机的超速离心与蔗糖密度梯度相结合。具体地说，密度梯度离心用于将外泌体与非囊泡颗粒（例如蛋白质和蛋白质/RNA聚集体）分离。因此，该方法将囊泡与不同密度的颗粒分离。足够的离心时间比较重要，否则如果外泌体部分具有相似的密度，则仍可能在外泌体部分中发现污染颗粒。该结构不会让大于1μm的细胞和其他颗粒进入布线区域。一些较小的颗粒和细胞碎片可以进入微柱区域，但被纳米纤毛排除，形成直径为30-200nm的孔。纤毛结构选择性地捕获外泌体和小细胞外囊泡。广州血液RNA外泌体分离制造商不同来源的外泌体可能需要采用不同的离心参数和分离方法。
对于外泌体的标记和鉴定，获得外泌体之后，如何对其进行鉴定又是一个困扰研究者的问题。国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年提议，对于分离获得的外泌体需要从三个层面进行鉴定：WB检测外泌体标志蛋白表达情况：外泌体膜上富含参与外泌体运输的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、热休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些细胞特异性蛋白。其中CD63/TSG101是较常用到的外泌体标志物。TEM鉴定外泌体形态：电镜具有较高的分辨率，可以直接观察到样品中外泌体的形态。NTA检测外泌体粒径及浓度：TEM可以观察外泌体的形态学特征，但无法体现样本中所有外泌体的粒径分布情况及整体浓度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技术可快速准确地分析外泌体的粒径分布及浓度，为外泌体鉴定提供有力证据。
为了正确使用外泌体作为DDS，我们必须考虑外泌体的成分和它们的形成途径。然后，还应描述外泌体亲和力和细胞摄取的特征。外泌体载体表现出不同的目的和功能，这要归功于外泌体作为基本的转运体本身就具有出色的特性。这可以用于细胞靶向，也可以作为药物的额外增强。迄今为止，ExoCarta在外泌体中发现了大约10,000种蛋白质、3500种mRNA和超过1100种不同的脂质。对于系统审查，出现了许多很棒的数据库，例如Vesiclepedia和ExoCarta，其中描述了外泌体分离程序和来源以及已识别的载体。外泌体的分离方法可能还存在一定的局限性和偏差。
外泌体的物理表征方法：常用的外泌体物理表征方法是基于显微镜的方法，例如透射电子显微镜、扫描电子显微镜、低温电子显微镜和原子力显微镜；动态光散射；纳米粒子跟踪分析；可调电阻脉冲传感；和单个EV分析等。用于分析外泌体浓度、定量和概况的分子生物方法主要包括：实时定量PCR、数字PCR技术（基于芯片的dPCR、液滴数字PCR、ddPCR）、蛋白质免疫印迹、全基因组测序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代测序）、微阵列图谱技术和ELISA技术等。外泌体的分离纯化有助于其后续研究，例如外泌体功能的解析等。合肥组织提取外泌体分离蛋白检测
外泌体分离的方法会影响外泌体样品的质量和数量。南昌外泌体分离蛋白检测
差速离心法分离外泌体的实验原理：外泌体是一种小的(40-100nm)细胞外膜囊泡，目前进行外泌体分离的普遍方法是差速离心法。应用差速离心法和粒径分析等是细胞外囊泡(EV)研究的重要步骤。已知细胞会分泌许多膜囊泡，这些囊泡的大小、分子含量及其形成机制各不相同具体取决于细胞的类型和当前状态。通常可以辨别出三个主要的EV群体：凋亡小体、脱落的囊泡和外泌体.凋亡小体是已知较大的囊泡，直径为800-5000nm，由凋亡后细胞的细胞质和质膜成分组成。脱落的囊泡和外泌体由非凋亡细胞释放。脱落的囊泡，也称为“胞外体”或有时称为“微泡”，是由质膜起泡产生的，一般的粒径尺寸范围为(50–1000nm)。南昌外泌体分离蛋白检测
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