逆转录过程由逆转录酶催化，此酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA（complementaryDNA,cDNA）。逆转录酶在生物界存在于逆转录病毒以及真核细胞（如端粒酶）中，拟逆转录病毒没有单独的逆转录酶，其DNA聚合酶带有逆转录酶的活性，可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒（HIV）就是一种逆转录病毒，含有逆转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有逆转录酶，例如端粒酶就是一种逆转录酶，推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。逆转录是2代测序、单细胞测序等技术的前置步骤。南京彩色反转录制造商
RT-PCR逆转录引物设计原则：1.上下游引物要保守：扩增子长度需选择一段保守片段（100-200bp）进行PCR扩增，选择片段需跨越内含子，因内含子的基因组DNA序列不会被扩增，也可减少从污染的基因组DNA中扩增得到的假阳性风险。引物选取同样需要保守。2.引物长度和Tm值：引物设计长度为18-25bp，Tm值在50-65℃之间，引物中GC含量在40-60%。设计引物时尽量避免出现4个或超过4个G碱基。RT-PCR实验阴性对照：反转录阴性对照应包括在所有的RT-PCR的实验中，用来检测DNA是否污染（如基因组DNA或PCR产物）。该对照所指不加反转录酶，通过反转录过程得到cDNA在进行荧光定量PCR检测。如检测到扩增，则样本中可能含有基因组DNA污染。茎环法逆转录混合蛋白质提取逆转录经常与细胞恶性转化有关，艾滋、乙肝等很多疾病也有逆转录过程。
逆转录的过程与端粒复制，逆转录酶通常具有多种活性，如逆转录活性、复制活性与RNA酶H活性。逆转录活性可以RNA为模板，合成与其序列互补的DNA链，生成DNA-RNA杂合双链。RNA酶H活性可以水解杂合双链中的RNA，得到与RNA互补的DNA单链（cDNA）。复制活性则用来合成双链DNA。HIV逆转录酶的活性部位。与复制类似，逆转录也是由5’向3’合成DNA，要求有模板和不少于四个核苷酸的引物。各种DNA聚合酶活性都需要引物，只有确认引物正确配对，才会进行DNA的合成。这是保证其忠实性的重要手段，逆转录酶也不例外。实验室合成cDNA时，经常会用合成的寡聚T（oligodT）作为引物，与mRNA的polyA配对。这个过程比较简单，因为引物结合在RNA链的末端，所以整条链的逆转录是一次性完成的。
反转录酶的注意事项，随机引物：适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，首先链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（<500bp）的增加和长片断、全长产物产物的降低。酵母菌逆转录酶是逆转录酶家族中的一个重要表示，逆转录在研究RNA表达调控等领域有普遍的应用前景。HIV病毒复制的一个重要步骤就是逆转录。
miRNA的加尾法逆转录和qPCR，miRNA与mRNA不同，成熟的miRNA的长度只有20nt左右，非常短，通常正向引物就足以覆盖其全长甚至有余，反向引物就无处安放了。那么如何实现miRNA的qPCR扩增呢？解决方案就是在逆转录的时候设法增加逆转录产物长度。普遍的方法有两种，加尾法和茎环法。经过加尾法或茎环法这种特殊的逆转录形式处理之后，得到的cDNA长度从原始的20nt增加到80nt以上，这样就能够实现miRNA的qPCR扩增了。RNA逆转录实验注意事项：选择合适的引物：但其对RNA的完整度和二级结构的要求较高，而且不适用于原核生物。随机引物可以根据碱基情况结合到几乎所有的RNA上，包括mRNA、tRNA和rRNA。逆转录实验过程需适当的RNA质量，过少或质量不佳将影响扩增效果。上海快速反转录费用
逆转录酶是逆转录过程中的重要酶类。南京彩色反转录制造商
RT-PCR逆转录中模板的选择：在RT-PCR实验中，选择总RNA或纯化的mRNA作为模板进行逆转录十分重要。mRNA虽然能提供略高的灵敏度，但总RNA经常使用，具有较mRNA更重要的优势。首先，其过程需要较少的纯化流程，这保证了更好的回收模板和更好的把结果标准化为起始的细胞数。第二，避免mRNA富集步骤，为了避免不同mRNA的回收率而带来结果偏移的可能性。总之，在大多数的应用中，目标基因的相对定量比检测的非常灵敏度更重要，因此在多数情况下，总RNA更适用。南京彩色反转录制造商
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