外泌体蛋白质特征是:膜结合四跨膜蛋白(CD9、CD63、CD81和CD82),以及常规用于分离的EpCAM和Rab5。其他公认的蛋白质是受体(CD46和CD55)、热休克蛋白(HSP;Hsc70、Hsp70和Hsp90)、参与外泌体形成的蛋白质(Alix、TSG101)和负责融合和转运的膜蛋白(GTP酶、膜联蛋白和flotillin;ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法检测这些标记蛋白可以用于确认外泌体的存在。也有相关研究称外泌体含有其他颗粒,如胆固醇(B淋巴细胞来源)、鞘脂、磷酸甘油酯和神经酰胺等。外泌体还运输形态发生素(Hedgehog、Wingless和Wingless-like),参与黑腹果蝇所描述的组织模式发育。外泌体与神经系统的关系复杂,通过在神经元间的转移,参与多种神经疾病的发生和病理机制的形成。合肥外泌体报价表
分离外泌体的方法之超滤:它使用孔径为50-450nm的膜过滤器从细胞碎片和较大的EV中分离外泌体。通过使用纳米尺寸的滤膜,可以分离出目标尺寸的外泌体。超滤法通常用作超速离心的后续步骤,以及凝胶过滤和色谱的较后一步。超滤可以通过切向流过滤(TFF)或直流过滤(DFF)方法进行处理。DFF方法也称为死端过滤,存在膜污染和颗粒分离受损的问题。此外,DFF只适用于小体积样品,例如高达30mL的样品。TFF也称为错流过滤是一种更快速、高效和方便的分离大规模外泌体体积的过程,TFF是样品流体切向流过滤膜并避免形成滤饼或堵塞的过程。合肥外泌体报价表外泌体介导的RNA转移对基因表达水平和遗传数据传递具有重要的调节作用。
外泌体分离方法之筛分分离法:该技术是通过膜从生物液体中筛分外泌体并通过压力或电泳进行过滤来分离外泌体。筛分分离法的分离时间较短,但分离的外泌体纯度却处于较高的水平。筛分分离法的缺点在于分离的外泌体回收率较低。总之,细胞外泌体提取、外泌体分离在疙瘩等研究领域发挥着重要作用。细胞外泌体分离方法目前多数还是采用高速离心机进行离心分离的技术方法,然而,其他几种分离技术,如过滤法、免疫分离法和筛分法,虽然也能进行外泌体分离,但每种方法都有其局限性,多数还是只应用于实验室、科学研究等领域。
CHO细胞外泌体的分离和表征:CHO细胞是一种普遍用于生物制药蛋白质生产的宿主。CHO细胞中分离外泌体主要采用聚合物的沉淀(PBP)技术从分批培养中分离和富集细胞外泌体囊泡。分离后的外泌体可以通过多种方法来检测和表征分离的囊泡,这些分析包括动态光散射(DLS)和Zeta电位测量、电子显微镜(EM)和外泌体标记物分析、RNA和脂质分析等。根据制造商的指南,使用TEI总外泌体分离试剂盒(Invitrogen)从培养基中分离外泌体。将细胞培养基以2000×g离心30分钟以去除细胞和任何碎片;随后将上清液小心移至离心管管中,加入0.5倍体积的TEI试剂,充分混合并在4°C下孵育过夜。然后将样品在4°C下以10,000×g离心1小时,然后在弃去上清液后,将富含外泌体的颗粒重新悬浮在75μlPBS缓冲液中。然后将样品储存在-20°C下,直到需要进行后续分析。优化外泌体分离方法可以用于解决外泌体复杂性掩盖的问题。
外泌体是直径为30-150nm的小细胞外囊泡。在生理和病理条件下,几乎所有类型的细胞都可以释放外泌体,在细胞通讯和表观遗传调控中发挥重要作用。外泌体天然存在于体液中,包括血液,唾液,尿液和脑脊液等,内部含有其来源细胞的核酸,蛋白等物质,因此基于外泌体的疾病诊断和治着方法得到了深入的研究。但是如何拿到纯净的外泌体一直是外泌体研究所面临的难题之一,因此研究人员也开发了许多外泌体分离的方法,来一起看一下吧。差速离心法:离心力从300×g到100,000×g的下进行多次循环离心,较后收集外泌体颗粒。密度梯度离心法:等密度梯度超速离心法是通过从下到上逐步降低密度分层。动区梯度超速离心法由两个梯度介质部分组成,样品根据密度/质量/大小被依次分离。不同来源的外泌体可能需要采用不同的离心参数和分离方法。东莞肺泡外泌体
外泌体的高纯度分离是外泌体研究的基础。合肥外泌体报价表
外泌体的表征方法之微流体分析技术:微流体技术在外泌体研究方面也起着推动作用。微流体技术不只提供了高质量、高特异性的数据,并且试剂消耗量低,通量高.基于微流体技术的研究方法需要结合使用微流控芯片,微流控芯片通常由玻璃基和聚二甲基硅氧烷(PDMS)膜制成,包含许多尺寸适合所分析样品的微通道。主要区别在于芯片的内表面,可以通过多种方式对其进行功能化,例如通过涂层、多层沉积、电沉积和蚀刻.目前研究中针对不同的微流控表征方法,也制造了不同类型的微芯片,包括免疫芯片、磁性芯片和电化学芯片。外泌体及其蛋白质也可以通过比色法(标记抗体/ELISA)、直接荧光染色(DiO染料)、电化学性质变化和光学特别方法进行检测。对于结果评估,还需要额外的设备,例如读板器或荧光显微镜等。合肥外泌体报价表
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