外泌体分离方法之筛分分离法:该技术是通过膜从生物液体中筛分外泌体并通过压力或电泳进行过滤来分离外泌体。筛分分离法的分离时间较短,但分离的外泌体纯度却处于较高的水平。筛分分离法的缺点在于分离的外泌体回收率较低。总之,细胞外泌体提取、外泌体分离在疙瘩等研究领域发挥着重要作用。细胞外泌体分离方法目前多数还是采用高速离心机进行离心分离的技术方法,然而,其他几种分离技术,如过滤法、免疫分离法和筛分法,虽然也能进行外泌体分离,但每种方法都有其局限性,多数还是只应用于实验室、科学研究等领域。外泌体受到多种因素的调控,例如细胞膜电位、氧化应激和信号转导途径等。上海组织提取外泌体分离公司
分离外泌体的方法之免疫亲和相互作用:免疫亲和法是利用外泌体表面蛋白(抗原)与其靶抗体或分离配体分子之间的免疫亲和相互作用原理分离纯外泌体的理想方法。它有助于根据其表面标志物分离特定类型的外泌体。基于微孔板的酶联免疫吸附测定(ELISA)是免疫亲和分离试剂盒的一个例子,用于根据外泌体表面标志物分离外泌体。Tetraspanin蛋白是这种分离方法的决定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫亲和外泌体分离中使用的抗体的常见示例。免疫亲和法可用于从结肠病细胞中分离外泌体,其效率高于超速离心和密度梯度分离。另外还有一种外泌体分离方法,该方法采用抗体包被的基于磁性颗粒的技术来分离外泌体。常州外泌体分离纯度高外泌体富集、分离和检测是当前外泌体研究的热点之一。
外泌体衍生物miRNA的重要应用:miRNA是一类主要的小分子、单链、非编码RNA分子,其成熟形式的长度在20到22个核苷酸(NT)之间,在几乎所有生物途径中发挥重要作用,包括细胞生长、增殖、分化、免疫反应,细胞凋亡,代谢和疙瘩发生。外泌体在体液中的主要作用是可以保护miRNA,防止其生物分子在非生理条件下(多次冻融循环、长期储存和极端pH)降解。据报道,外泌体来源的miRNA在-20°C下可保持稳定长达5年,并且对冻融循环具有抵抗力.这也使外泌体成为病症和其他疾病的潜在生物标志物。miRNA与包括病症在内的许多疾病的发病机制有关,并且还被证明被远端或附近的受体细胞吸收作为外泌体中的货物,作为细胞间通讯的一种方法,可能会影响发病机制。所以,外泌体可以被看作是miRNA转移至目标受体细胞的载体。
外泌体通常被认为是细胞间信号分子,包含许多蛋白质、核酸、细胞因子、转录因子和其他细胞来源的颗粒。外泌体不只可以向局部环境传递信息,还可以向距离很远的细胞和组织传递信息。这可能作为一般信号和通信通路,但也可能参与致病基因扩散和恶性疙瘩进一步恶化。迄今为止,已证实外泌体存在于体液中,例如羊水、血清、母乳、附睾液、唾液、尿液、腹水和胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、滑液和体外细胞培养上清液中。细胞排出的外泌体也可作为去除不必要的蛋白质和核酸的一种方式,例如,在细胞成熟(网织红细胞)或排泄系统(肾的内脏和小管)期间的外泌体。外泌体不是干细胞,是干细胞较精华的部分。
外泌体蛋白质特征是:膜结合四跨膜蛋白(CD9、CD63、CD81和CD82),以及常规用于分离的EpCAM和Rab5。其他公认的蛋白质是受体(CD46和CD55)、热休克蛋白(HSP;Hsc70、Hsp70和Hsp90)、参与外泌体形成的蛋白质(Alix、TSG101)和负责融合和转运的膜蛋白(GTP酶、膜联蛋白和flotillin;ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法检测这些标记蛋白可以用于确认外泌体的存在。也有相关研究称外泌体含有其他颗粒,如胆固醇(B淋巴细胞来源)、鞘脂、磷酸甘油酯和神经酰胺等。外泌体还运输形态发生素(Hedgehog、Wingless和Wingless-like),参与黑腹果蝇所描述的组织模式发育。未来可开发更加高效和精确的外泌体分离和检测技术。盐城外泌体哪家好
超高速离心是常用的外泌体分离方法之一。上海组织提取外泌体分离公司
外泌体分离方法之亲和层析分离法:在亲和层析分离法方面,主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素将结合存在于外泌体表面的糖基化蛋白质,从而使外泌体沉淀。Vn肽分离技术基于其对含有HSP的细胞外颗粒的高亲和力。然而,这种方法比较容易使提取物被膜表面上含有上述标记物的细胞和其他颗粒污染。外泌体分离方法之介电泳分离法:介电泳分离法主要利用不同大小的粒子在不均匀电场中的位置差异。外泌体被吸引到高电区域,而较大的颗粒将位于低电区域。该方法速度快,适合用于高通量筛选,但缺点是需要加热。上海组织提取外泌体分离公司
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