CHO细胞外泌体的分离和表征:CHO细胞是一种普遍用于生物制药蛋白质生产的宿主。CHO细胞中分离外泌体主要采用聚合物的沉淀(PBP)技术从分批培养中分离和富集细胞外泌体囊泡。分离后的外泌体可以通过多种方法来检测和表征分离的囊泡,这些分析包括动态光散射(DLS)和Zeta电位测量、电子显微镜(EM)和外泌体标记物分析、RNA和脂质分析等。根据制造商的指南,使用TEI总外泌体分离试剂盒(Invitrogen)从培养基中分离外泌体。将细胞培养基以2000×g离心30分钟以去除细胞和任何碎片;随后将上清液小心移至离心管管中,加入0.5倍体积的TEI试剂,充分混合并在4°C下孵育过夜。然后将样品在4°C下以10,000×g离心1小时,然后在弃去上清液后,将富含外泌体的颗粒重新悬浮在75μlPBS缓冲液中。然后将样品储存在-20°C下,直到需要进行后续分析。外泌体的定量检测和分析可作为疾病诊断和治着中的新型指标。北京组织提取外泌体分离
外泌体的提取主要包括以下几种方式:一是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。二是微流控分离法,该方法通过负压及震荡等机械原理分离外泌体,产量纯度均具有较大幅度提高,但需要特定设备配合。外泌体分离方法之纳米粒径分析法:确定性横向位移依赖于颗粒流动路径的变化,而颗粒流动路径取决于颗粒尺寸。这种方法虽然比较简单,但是需要使用扫描电镜技术、动态光散射技术、纳米粒子跟踪分析技术、单粒子干涉反射成像传感器(SP-IRIS)技术等。对于外泌体大小、形态、外泌体的浓度、zeta电位等分析也可以使用粒度分析仪。天津外泌体分离企业外泌体可通过特定的组装和功能修饰,提高其对宿主细胞的选择性靶向性。
当外泌体在1983年头次被发现后,其被认为是细胞排泄废物的一种方式,如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、疙瘩侵袭等方方面面。有研究表明疙瘩来源的外泌体参与到疙瘩细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了疙瘩的生长与侵袭。
外泌体分离方法之超速离心法:超速离心基于颗粒的大小(重量)及其在离心力(100,000–110,000×g)下的离心沉降。至于去除的细胞碎片和不需要的颗粒可以通过称为差速离心的几步慢速离心来获得。外泌体的纯化可以采用蔗糖梯度密度离心纯化法:即:在蔗糖梯度(1.13–1.19g/mL)或缓冲液中进行,以实现更高的富集、产量和纯度增加。外泌体分离方法之微流控分离法:微流控分离法主要是在微芯片上进行的,这里我们需要提及的是,微流控分离法法可用于外泌体分离(免疫结合和磁结合、过滤),效率相对较高(约90%)。外泌体的分离纯化有助于其后续研究,例如外泌体功能的解析等。
分离外泌体的方法之密度梯度超速离心:有助于根据尺寸、结构和形态差异分离和分析纳米级材料。DGUC“细化”分离的囊泡,并使用密度为1.07g/mL或更低的密度梯度培养基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌体分离的常见梯度培养基。有市售的碘沙醇密度梯度分馏膜,用于将外泌体与非囊泡成分分离。将生物悬浮液添加到梯度培养基中,并以完整的梯度分层组分。DGUC有助于分离具有相同梯度的样品。凋亡小体、蛋白质聚集体和其他非外泌体微囊泡可能通过超速离心干扰较终分离的外泌体产物。DGUC有助于克服超速离心的局限性,并提供较纯净的外泌体。DGUC在精细化和高性能外泌体分离方法中的应用。简而言之,在分离细胞碎片后,应用1×105g用60%碘沙醇离心3小时,然后用1×10离心5用40%碘沙醇g18小时有助于形成多达12个碘沙醇梯度级分和两个外泌体级分。超速离心使用连续的密度梯度或逐步梯度来较小化这些颗粒材料对外泌体的干扰。外泌体在心血管系统中扮演着重要的调节作用,与各种疾病如心肌梗死、心衰等相关联。天津外泌体分离企业
的外泌体分离技术采用了磁珠分离和滤膜分离的方法。北京组织提取外泌体分离
外泌体的分离方法:目前,有许多可用的外泌体分离方法。比较传统的外泌体分离方法是超速离心,许多人将其视为金标准。其他技术主要基于大小排阻或抗体介导的标记外泌体分离。每种分离方法在纯度、数量、效率和通量方面都不同。超速离心法分离法的缺点是外泌体结构容易发生改变,造成外泌体的结构不一致性甚至会导致外泌体受损。超滤法:超滤法使用的是微孔过滤器;因此,较大的颗粒将从滤液中排除。它可以与离心结合使用,通过初步去除细胞碎片等大颗粒来加速外泌体的纯化。不过使用此方法需要防止孔隙堵,不适合大规模的样本处理。北京组织提取外泌体分离
苏州英泽生物医药科技有限公司是一家生物医药和医疗领城内的技术开发、技术咨询、技术转让及相 关的技术服务;化工原料及产品、生物仪器试剂(不含危化 品)、仪器仪表、电子产品的购销;生物技 术推广服务;货物或技术进出口(国家禁止或涉及行政审批的 货物和技术进出口除外) (依法须经批准的项目, 经相关部门批准后方可开展经营活 动) 一般项目:医学研究和试验发展;工业酶制剂研发(除依法须 能分准机项目外的公司,致力于发展为创新务实、诚实可信的企业。英泽生物深耕行业多年,始终以客户的需求为向导,为客户提供高质量的RNA\DNA试剂盒,外泌体提取试剂盒,逆转录试剂盒,荧光定量PCR。英泽生物继续坚定不移地走高质量发展道路,既要实现基本面稳定增长,又要聚焦关键领域,实现转型再突破。英泽生物始终关注医药健康行业。满足市场需求,提高产品价值,是我们前行的力量。