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外泌体基本参数
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外泌体企业商机

分离外泌体的方法之免疫亲和相互作用:免疫亲和法是利用外泌体表面蛋白(抗原)与其靶抗体或分离配体分子之间的免疫亲和相互作用原理分离纯外泌体的理想方法。它有助于根据其表面标志物分离特定类型的外泌体。基于微孔板的酶联免疫吸附测定(ELISA)是免疫亲和分离试剂盒的一个例子,用于根据外泌体表面标志物分离外泌体。Tetraspanin蛋白是这种分离方法的决定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫亲和外泌体分离中使用的抗体的常见示例。免疫亲和法可用于从结肠病细胞中分离外泌体,其效率高于超速离心和密度梯度分离。另外还有一种外泌体分离方法,该方法采用抗体包被的基于磁性颗粒的技术来分离外泌体。外泌体分离的过程需要进行多次洗涤和离心。泉州血液DNA外泌体供货商

外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验。二是PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度较高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法较新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。福州外泌体价格分离过程中避免对外泌体结构和功能造成影响至关重要。

对于外泌体的标记和鉴定,获得外泌体之后,如何对其进行鉴定又是一个困扰研究者的问题。国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年提议,对于分离获得的外泌体需要从三个层面进行鉴定:WB检测外泌体标志蛋白表达情况:外泌体膜上富含参与外泌体运输的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、热休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些细胞特异性蛋白。其中CD63/TSG101是较常用到的外泌体标志物。TEM鉴定外泌体形态:电镜具有较高的分辨率,可以直接观察到样品中外泌体的形态。NTA检测外泌体粒径及浓度:TEM可以观察外泌体的形态学特征,但无法体现样本中所有外泌体的粒径分布情况及整体浓度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技术可快速准确地分析外泌体的粒径分布及浓度,为外泌体鉴定提供有力证据。

差速离心法分离外泌体的实验原理:与等密度和梯度离心相反,差速离心从离心管内颗粒的均匀初始分布开始。在开始一轮离心过程中,位于管底部附近的一部分目标小颗粒不可避免地与较大颗粒共同沉淀。这种共沉淀导致较小颗粒的产量降低。然而,选择大颗粒,起初位于管半月板附近,在开始一轮离心过程中可能没有足够的时间到达管底,从而污染较后一个离心步骤产生的小颗粒颗粒。显然,交叉污染的程度取决于不同粒子群的相对沉降速度和离心条件。在被分离的粒子的沉降速度之间存在显着(数量级)差异的情况下,可以有效地优化差速离心协议以获得目标粒子群的高产量和足够纯度。此外,当不同颗粒部分之间的沉降速率只存在微小差异时,优化过程不太成功。在这些情况下,取决于离心条件。外泌体分离的方法会影响外泌体样品的质量和数量。

使用差速离心法分离外泌体主要需要注意的是转子的选择。“摆动桶”(SW)转子和“定角”(FA)转子,这些转子的几何形状根本不同,因此沉降特性也不同。这些转子之间的主要区别在于:FA转子,与旋转半径相比,沉积颗粒的较大路径长度通常较小,允许近似恒定迁移率并简化描述。然而,第二个区别是圆形FA管的水平横截面是椭圆形的,不同粒子的路径长度根据轨迹与椭圆长轴的距离而不同。由于较短的路径长度,外面颗粒可能沉降得更快,需要根据不同的实验需要进行选择。外泌体与生物体的免疫应答密切相关,通过它们携带的抗原和免疫调节分子对免疫系统起到调节作用。上海外泌体分离公司

外泌体在心血管系统中扮演着重要的调节作用,与各种疾病如心肌梗死、心衰等相关联。泉州血液DNA外泌体供货商

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