逆转录的发现有重要的理论意义和实践意义。对分子生物学的中心法则进行了修正和补充。经典的中心法则认为：DNA的功能兼有遗传信息的传递和表达，因此，DNA处于生命活动的中心位置。逆转录现象说明：至少在某些生物中，RNA同样兼有遗传信息传递和表达功能。修正后的中心法则表示为：是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。某些病毒中的RNA自我复制和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程（某些致死病毒）。有些亚病毒例如朊病毒，这种亚病毒没有核酸，是一种因错误折叠而形成的结构异常的蛋白质，以蛋白质直接形成蛋白质，可促使与自身具有相同氨基酸序列的蛋白质发生同样的折叠错误，从而导致大量结构异常的蛋白质的形成。当然，一般不认为亚病毒属于生物。逆转录实验过程中避免光照，防止RNA样品和试剂受光降解或刺激。彩色逆转录酶费用
逆转录实验步骤：引物浓度计算方法：（新合成的引物的稀释）假如终浓度为XuM（pmol/ul）加DEPC水体积（ul）=（OD×33×1000000）/（分子量×X）。用AMV逆转录酶进行RT（10ul体积）1、准备0.65mlEP管。2、加入4.5ulDEPC水，1ul引物，1ul模板RNA。3、稍离心，100℃沸水裕1min。4、加入0.5uldNTP，2ul5×Buffer，1ulAMV逆转录酶。5、稍离心，封口膜封口，42℃水浴90℃作RT。6、100℃沸水裕3min灭活AMV。7、立即PCR或－20℃保存。逆转录实验时注意事项：为避免RNA酶污染，在RT中仍要佩戴一次性手套和口罩。彩色逆转录酶费用逆转录实验时要记录反应体系的温度、时间、反应试剂的添加量等参数。
RT-PCR逆转录引物设计原则：1.上下游引物要保守：扩增子长度需选择一段保守片段（100-200bp）进行PCR扩增，选择片段需跨越内含子，因内含子的基因组DNA序列不会被扩增，也可减少从污染的基因组DNA中扩增得到的假阳性风险。引物选取同样需要保守。2.引物长度和Tm值：引物设计长度为18-25bp，Tm值在50-65℃之间，引物中GC含量在40-60%。设计引物时尽量避免出现4个或超过4个G碱基。RT-PCR实验阴性对照：反转录阴性对照应包括在所有的RT-PCR的实验中，用来检测DNA是否污染（如基因组DNA或PCR产物）。该对照所指不加反转录酶，通过反转录过程得到cDNA在进行荧光定量PCR检测。如检测到扩增，则样本中可能含有基因组DNA污染。
反转录酶的用处：由它催化转录合成的DNA称为互补DNA(cDNA)。通常情况下，细胞内的转录应由DNA到RNA的，所得RNA为信使RNA（mRNA）供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中，要实现自身扩增，必须具有DNA，因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。逆转录酶可用RT—PCR，将RNA转变为DNA后扩增，以获得RNA的序列。1970年从致死RNA病毒中发现了反转录酶，并认为此酶与病毒的致死性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质非常化，遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究，已成为研究这些学科的有力工具。逆转录是一种将RNA反转录为DNA的生物化学过程。
miRNA加尾法逆转录：miRNA加尾法利用基因组中压缩miRNA元件，通过识别不同转录起始位置，将miRNA连接到其前体mRNA上这种方法可以注意到与miRNA相关的各种信息，例如miRNA功能特异性，miRNA的转录条件和miRNA的表达量等。miRNA的逆转录允许科学家们用特定的miRNA测序技术来节省时间。miRNA逆转录，可以检测miRNA的表达以及miRNA与RNA的瓦作关系，还可以检测miRNA的调节的位点。同样，miRNA表达量的研究也能够通过miRNA逆转录来进行，从而帮助我们更好地了解miRNA在细胞信号转导中发挥着重要作用。逆转录技术的发展使RNA研究得到极大便利。上海彩色逆转录酶测序
逆转录实验尽量避免多次冻融处理RNA样品，避免样品质量下降。彩色逆转录酶费用
逆转录实验的准备工作：1、实验器具与材料：（1）移液头：200ul、10ul；（2）吸头：200ul、20ul；（3）EP管1。5ml、100ul；（4）水浴箱。2、实验器具的处理与准备，塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时小头头需要用吸管打入DEPC水）37℃过夜，然后送至高压3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小时左右烘干），试验前将头头放入吸头台。3、试剂配制和准备：（1）DEPC水：泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。逆转录中所用的DEPC水的配制：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压，后分装到几个1。5mlEP管中，-20℃中保存备用。（2）RT中所需要的各种试剂。彩色逆转录酶费用
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