外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验。二是PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度较高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法较新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。外泌体在很多生理和病理情况下都发挥着不可或缺的作用。苏州快速提取外泌体报价表
人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而打开细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。合肥血液外泌体蛋白检测手动超高速离心和自动化离心仪器的分离效果可能存在差异。
生物试剂Tetraspanins是常见的外泌体标志物。它们包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins参与外泌体的产生。在抗原呈递细胞中,MHC-II分子的功能通过它们整合到富含四跨膜蛋白CD9的细胞质膜区域中来调节。CD63外泌体蛋白被认为是病症的蛋白质标志物。此外,四跨膜蛋白家族的另一成员CD81在丙型肝炎的细胞进入中起重要作用。慢型丙型肝炎患者血清中的外泌体CD81会升高,表明CD81可能是丙型肝炎染上的标志物。胶质母细胞瘤表皮生长因子受体vIII(EGFRvIII)被认为是胶质母细胞瘤的标志物。关于中枢的神经系统,在脑疙瘩者血清中分离的外泌体中也检测到了EGFR、EGFRvIII和TGFβ。
外泌体的分离方法:目前,有许多可用的外泌体分离方法。比较传统的外泌体分离方法是超速离心,许多人将其视为金标准。其他技术主要基于大小排阻或抗体介导的标记外泌体分离。每种分离方法在纯度、数量、效率和通量方面都不同。超速离心法分离法的缺点是外泌体结构容易发生改变,造成外泌体的结构不一致性甚至会导致外泌体受损。超滤法:超滤法使用的是微孔过滤器;因此,较大的颗粒将从滤液中排除。它可以与离心结合使用,通过初步去除细胞碎片等大颗粒来加速外泌体的纯化。不过使用此方法需要防止孔隙堵,不适合大规模的样本处理。外泌体的构成:外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。
外泌体的表征方法之光学方法:目前,光学方法是外泌体表征的主要方法,即动态光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和纳米粒子跟踪分析(NTA)。这些方法允许对尺寸(DLS0.5–200nm;MALS10–500nm;NTA10–1000nm)、尺寸分布和浓度进行高分辨率测量。DLS和MALS的结合增加了测量范围(0.5–500nm)和精度。光学方法比较受欢迎的,但缺点是灵敏度低、试剂消耗高以及需要昂贵的设备。在使用纳米粒子跟踪分析NTA方法过程中,荧光染料的加入也提高了分辨率,并允许通过使用荧光标记来表征表面免疫表型。从而确定标记物存在。外泌体可作为一种疙瘩标志物进行检测,通过其生物学特征进行诊断和治着。合肥血液外泌体蛋白检测
外泌体携带的小分子物质(如ATP、GTP等)参与细胞生命活动、代谢、细胞生长和分化等生物学进程。苏州快速提取外泌体报价表
外泌体是直径为30-150nm的小细胞外囊泡。在生理和病理条件下,几乎所有类型的细胞都可以释放外泌体,在细胞通讯和表观遗传调控中发挥重要作用。外泌体天然存在于体液中,包括血液,唾液,尿液和脑脊液等,内部含有其来源细胞的核酸,蛋白等物质,因此基于外泌体的疾病诊断和治着方法得到了深入的研究。但是如何拿到纯净的外泌体一直是外泌体研究所面临的难题之一,因此研究人员也开发了许多外泌体分离的方法,来一起看一下吧。差速离心法:离心力从300×g到100,000×g的下进行多次循环离心,较后收集外泌体颗粒。密度梯度离心法:等密度梯度超速离心法是通过从下到上逐步降低密度分层。动区梯度超速离心法由两个梯度介质部分组成,样品根据密度/质量/大小被依次分离。苏州快速提取外泌体报价表
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