CHO细胞外泌体的分离和表征：CHO细胞是一种普遍用于生物制药蛋白质生产的宿主。CHO细胞中分离外泌体主要采用聚合物的沉淀(PBP)技术从分批培养中分离和富集细胞外泌体囊泡。分离后的外泌体可以通过多种方法来检测和表征分离的囊泡，这些分析包括动态光散射(DLS)和Zeta电位测量、电子显微镜(EM)和外泌体标记物分析、RNA和脂质分析等。根据制造商的指南，使用TEI总外泌体分离试剂盒（Invitrogen）从培养基中分离外泌体。将细胞培养基以2000×g离心30分钟以去除细胞和任何碎片；随后将上清液小心移至离心管管中，加入0.5倍体积的TEI试剂，充分混合并在4°C下孵育过夜。然后将样品在4°C下以10,000×g离心1小时，然后在弃去上清液后，将富含外泌体的颗粒重新悬浮在75μlPBS缓冲液中。然后将样品储存在-20°C下，直到需要进行后续分析。外泌体与生物体的免疫应答密切相关，通过它们携带的抗原和免疫调节分子对免疫系统起到调节作用。成都外泌体价格
外泌体的表征分析：Zeta电位：通过电泳光散射(ELS)测量的Zeta电位测量粒子在电泳场中的速度。Zeta电位是胶体分散体稳定性的指标（非常值）和囊泡表面电荷的量度（+或-符号）。电子显微镜分析：对于电子显微镜分析，外泌体制剂在PBS缓冲液中按1:10稀释，随后在等体积的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分钟。然后将样品置于formvar-carbon涂层的600目铜网格上，并在室温下干燥5分钟。随后将样品在乙酸双氧铀溶液（2%水溶液）中进行对比，并在电子显微镜（Jeol1230TEM）下观察，加速电压为80kV，并连接到数码相机进行观察。成都外泌体价格外泌体可以作为一种新型的药物输送系统，利用其高度选择性的靶向性，有效地提高药物的生物利用度。
外泌体分离方法之尺寸排阻层析法：尺寸排阻层析法也被称为凝胶过滤层析法，这种方法是基于凝胶孔的大小和外泌体的大小，大于凝胶孔径的颗粒被洗脱；反之，小于凝胶孔径的颗粒将被抑制。凝胶过滤层析分离法总体上能获得较高的纯度和产量。建议与超滤相结合，这种方法可提供更少的蛋白质污染和更高的外泌体回收率。凝胶过滤层析分离法的缺点是凝胶的成本过高。外泌体分离方法之声学流体分离：声学流体分离技术利用声场根据粒子的大小、密度和可压缩性来分离粒子。生物样品在此过程中不会受到损坏，并且分离的本身是非接触式、高效的和无标记的。
差速离心法分离外泌体的实验原理：与等密度和梯度离心相反，差速离心从离心管内颗粒的均匀初始分布开始。在开始一轮离心过程中，位于管底部附近的一部分目标小颗粒不可避免地与较大颗粒共同沉淀。这种共沉淀导致较小颗粒的产量降低。然而，选择大颗粒，起初位于管半月板附近，在开始一轮离心过程中可能没有足够的时间到达管底，从而污染较后一个离心步骤产生的小颗粒颗粒。显然，交叉污染的程度取决于不同粒子群的相对沉降速度和离心条件。在被分离的粒子的沉降速度之间存在显着（数量级）差异的情况下，可以有效地优化差速离心协议以获得目标粒子群的高产量和足够纯度。此外，当不同颗粒部分之间的沉降速率只存在微小差异时，优化过程不太成功。在这些情况下，取决于离心条件。外泌体的转移涉及细胞因子、基质降解酶和细胞外基质重塑等多种调节步骤。
外泌体分离方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技术通常包括将生物流体与含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速离心。用于基于聚合物的沉淀的较常见聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。这种聚合物的沉淀可以对分离的外泌体产生温和影响而且可以产生中性的pH值。由此，出现了几种常见的外泌体试剂盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速执行，无需额外设备，只需用高速离心机进行超速离心可以获得高产量的外泌体。但是此方法的缺点是：非外泌体材料对外泌体分离物的污染仍然是基于聚合物的分离方法的一个问题。此外，分离物中的聚合物可能会干扰下游分析。分离外泌体后需要通过电镜等方式进行鉴定。扬州快速提取外泌体
外泌体分离的过程需要进行多次洗涤和离心。成都外泌体价格
外泌体的物理表征方法：常用的外泌体物理表征方法是基于显微镜的方法，例如透射电子显微镜、扫描电子显微镜、低温电子显微镜和原子力显微镜；动态光散射；纳米粒子跟踪分析；可调电阻脉冲传感；和单个EV分析等。用于分析外泌体浓度、定量和概况的分子生物方法主要包括：实时定量PCR、数字PCR技术（基于芯片的dPCR、液滴数字PCR、ddPCR）、蛋白质免疫印迹、全基因组测序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代测序）、微阵列图谱技术和ELISA技术等。成都外泌体价格
