磁珠本身并不直接参与电泳过程,但它们可以用于电泳后的样品处理,特别是在核酸(DNA或RNA)的提取和纯化过程中。以下是使用磁珠进行电泳后样品处理的一般步骤:1.**凝胶电泳**:-首先,将DNA或RNA样品通过凝胶电泳进行分离。凝胶通常是琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶,根据样品的大小和类型选择合适的凝胶浓度和缓冲体系。2.**观察和切割**:-电泳完成后,使用紫外线照射凝胶并使用适当的染料(如EB或SYBRGreen)对DNA或RNA进行染色,以在紫外光下观察到DNA或RNA的条带。3.**样品提取**:-确定目标DNA或RNA条带后,使用干净的工具(如切割器或移液枪)从凝胶中切割出含有目标分子的凝胶片段。4.**磁珠准备**:-根据磁珠试剂盒的说明书,准备磁珠。通常包括磁珠的重悬和可能的表面修饰,以确保它们能够特异性地结合目标核酸。5.**样品与磁珠混合**:-将切割出的凝胶片段转移到含有磁珠的溶液中,温和地混合以促进磁珠与核酸的结合。6.**磁分离**:-将含有磁珠和核酸的混合物置于磁分离架上,利用磁场使磁珠快速聚集在管底,从而实现与溶液的分离。7.**洗涤**:-移除未结合的溶液,向磁珠上加入洗涤液,再次进行磁分离以去除杂质。TBE (Thymine base editor):这是一种新型的碱基编辑工具,不依赖脱氨酶,能够通过人源化尿嘧啶DNA-糖基化酶。Recombinant Human FZD10/Frizzled-10 Protein-VLP
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease)高度特异性地作用于5'端磷酸化的双链DNA主要通过以下几个方面实现:1.**结构特异性识别**:Lambda核酸外切酶具有识别特定DNA结构的能力,特别是5'端磷酸化的双链DNA。这种识别能力通常由酶的活性位点结构决定,能够与5'-磷酸基团形成特定的相互作用。2.**酶活性位点**:酶的活性位点含有氨基酸残基,这些残基能够与5'-磷酸基团形成氢键或其他非共价相互作用,从而稳定酶与DNA的结合。3.**切割机制**:Lambda核酸外切酶通过水解5'-磷酸二酯键来降解DNA链。它从5'端开始,逐个移除核苷酸,直到遇到非5'-磷酸化的末端或遇到结构上的障碍。4.**低活性对非特异性底物**:对于5'-羟基(OH)末端的DNA或单链DNA,Lambda核酸外切酶的活性降低,因为这些底物缺乏与酶活性位点结合所需的特异性相互作用。5.**酶动力学**:Lambda核酸外切酶对5'-磷酸化双链DNA的酶动力学参数(如Km和Vmax)与对非特异性底物的参数有差异,这反映了其对特异性底物的高亲和力和高催化效率。6.**过程性(Processivity)**:一旦Lambda核酸外切酶结合到特异性底物上,它可以连续移除多个核苷酸,而不需要频繁地与底物解离和重新结合,这增加了酶的效率。Recombinant Human E-Cadherin/Cadherin-1 Protein,His Tag牛痘DNA拓扑异构酶I具有解超螺旋的活性,可以解开双链闭合环状DNA的超螺旋结构,便于后续的酶切反应。
DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术,用于分离、鉴定和定量DNA片段。以下是关于DNA琼脂糖凝胶电泳的一些关键点:1.**原理**:-利用琼脂糖凝胶作为介质,DNA片段在电场作用下根据其大小和电荷差异进行分离。较小的DNA片段迁移速度快,而较大的片段迁移速度慢。2.**琼脂糖**:-一种由琼脂糖粉末和缓冲液(如TAE或TBE)混合制成的凝胶。琼脂糖浓度通常在0.7%到2%之间,浓度越高,分辨率越高,但凝胶孔隙越小,迁移速度越慢。3.**样品准备**:-DNA样品通常需要在加载前进行适当的处理,如纯化、稀释,有时还需添加样品缓冲液以保证样品在电泳过程中的稳定性。4.**加载样品**:-使用微量移液管将样品和加载缓冲液(通常含有追踪染料,如溴酚蓝)混合后,小心地加载到凝胶孔中。5.**电泳**:-将凝胶置于电泳槽中,连接电源,施加恒定电压进行电泳。电压和时间根据凝胶浓度和所需分辨率进行调整。6.**染色**:-电泳完成后,为了可视化DNA条带,通常使用荧光染料如EB(溴化乙锭)或SYBRGreen进行染色。染色后的凝胶在紫外光下观察,DNA条带会发出荧光。7.**分析**:-通过比较DNA条带的位置和已知大小的DNA标准品(DNAladder),可以估计DNA片段的大小。
BloodDirectPCRMasterMix(2×)适合血液样本的PCR扩增主要通过以下几个方面:1.**抗血液抑制剂能力**:该预混合溶液含有的DNA聚合酶和其他成分能够抵抗血液样本中的PCR抑制剂,如胆酸盐、血红素、蛋白质等。2.**优化的缓冲体系**:预混合溶液中的缓冲体系经过特别优化,以适应血液样本中的特定条件,包括pH、离子强度和Mg2+浓度,从而提高PCR扩增的效率和特异性。3.**高保真DNA聚合酶**:包含的DNA聚合酶具有高保真度,能够在复制DNA时减少错误,保证扩增结果的准确性。4.**快速扩增速度**:一些BloodDirectPCRMasterMix产品具有快速扩增的特点,可以缩短PCR实验的时间。5.**宽泛的GC含量适应性**:该产品可以用于扩增不同GC含量的基因,包括高GC和低GC区域,提高了PCR的适用性。6.**直接使用血液样本**:无需对血液样本进行DNA提取或纯化,可以直接将抗凝血样品或干血斑样品加入PCR反应中。7.**兼容性**:兼容多种抗凝剂,如EDTA、肝素或柠檬酸钠,适用于不同来源的血液样本。8.**简化的操作流程**:由于省去了DNA提取的步骤,BloodDirectPCRMasterMix简化了实验操作流程,减少了实验时间和潜在的污染风险。在50 μL的反应体系中,建议使用1.5 μL的5× PCR Enhancer(如果需要)和0.5 μL的Phusion DNA Polymerase。
Blood Direct PCR Master Mix (2×)的组分通常包括以下几类:高保真DNA聚合酶:例如,NEB的Q5 Blood Direct 2X Master Mix中包含的Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase,这是一种热稳定性DNA聚合酶,具有3'→5'核酸外切酶活性,并与Sso7d结构域融合以增强过程性3940。dNTPs:提供DNA合成所需的四种脱氧核苷三磷酸。优化的缓冲体系:包含适合于血液样本PCR扩增的pH和离子强度,以及能够抵抗血液样本中抑制剂的特殊成分。稳定剂:保证预混合溶液在储存和使用过程中的稳定性。抗抑制剂成分:一些Blood Direct PCR Master Mix含有能够抵抗血液样本中可能存在的PCR抑制剂的成分。可选的染料:某些产品可能含有用于电泳的染料,允许PCR产物直接上样进行电泳分析,无需额外的上样缓冲液。其他可选组分:根据需要,可能包括MgCl2、EDTA、DMSO等,用于优化特定样本或反应条件42。Taq DNA Polymerase 能够在相对较高的温度下保持稳定,其适催化温度在75-80°C。Recombinant Porcine IL-2 Protein
牛痘DNA拓扑异构酶I是一种来源于牛痘病毒的酶,有多种作用于DNA分子的能力。Recombinant Human FZD10/Frizzled-10 Protein-VLP
5'DNA腺苷酰化试剂盒中使用的酶通常被称为腺苷酰化酶(Adenylase),这种酶能够催化5'端磷酸化的单链DNA或RNA(pDNA或pRNA)转换成5'端腺苷酰化DNA或RNA(AppDNA或AppRNA)。根据搜索结果,该酶的来源是嗜热古细菌,在大肠杆菌中进行表达并纯化而获得。这种酶在反应中将ATP分解成AMP和PPi,然后将AMP转移到单链DNA的5'磷酸基团上,形成腺苷酰化单链DNA,从而制备出腺苷酰化接头(linker)。此外,一些5'DNA腺苷酰化试剂盒中使用的酶是MthRNA连接酶(例如NEB#M2611A),这种酶也用于生成高产量的5'腺苷酰化DNA,并且操作简便,具有超过95%的效率,无需凝胶纯化即可完成单步反应。MthRNA连接酶是一种已知能够在65℃下有效工作的酶,有助于避免DNA的二级结构对腺苷酰化反应的干扰。这些酶的高效率和特异性使得5'DNA腺苷酰化试剂盒在单链DNA的5'端腺苷酰化修饰中非常有效,常用于miRNA等3'端为羟基的RNA或单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等应用中。Recombinant Human FZD10/Frizzled-10 Protein-VLP
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一种从嗜热脂肪芽孢杆菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是关于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些关键信息:来源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更强的5'-3' DNA聚合酶活性、链置换活性和dUTP耐受性,适合用于抗污染的等温扩增反应,如LAMP和CPA等。应用:主要应用于等温DNA扩增,包括环介导等温扩增(LAMP)和其他等温扩增技术。规格:活性定义:1 U指的是在65°C下3...